トリテペンサポニン含有抽出物のHPLC分析における内部標準としてのジギトキシンとジゴキシンの使用

はじめに：サポニンは、さまざまな構造依存性の生物活性を有する広く分布している複雑な植物グリコシドです。主に浄化の困難の結果として、利用可能な基準が不足しているため、個々のサポニンの定量化は困難です。総サポニン含有量の決定は問題があり、多くの場合、ブタノールの溶解度、溶血活性、または色付き誘導体の形成に基づいて非特異的な方法に依存します。 目的：HPLC-PADベースの分析の内部標準として、容易に入手可能なカルデノリド、デジトキシン（1）およびジゴキシン（2）の使用に基づいて、一般的な定量的方法を開発する。 方法論：カルデノリドは、検出器応答の直線性と再現性を確立するためにさまざまな濃度で動作し、その後、HPLC-PADによるいくつかの植物由来の抽出物におけるトリテルペンサポニンの定量化のための内部標準として評価されました。他の抽出物から大部分が解放されたサポニンの混合物は、水メタノール勾配を使用して固相抽出カラム（SPE）上の総抽出物の分画によって得られ、キャリブレーション曲線の構築に使用されました。ネガティブイオンモード（ESI（ - ））でのエレクトロスプレーイオン化を使用した単一の四重極質量検出器を介して、サポニンの識別と構造情報が得られました。 結果：5種の6つのサンプルのサポニン含有量を決定し、文献の結果とブタノール水分配に基づく重量測定法と比較しました。結果は一般に文献報告と一致し、重量測定のブタノール水分配よりも優れていました。 結論：デジトキシンとジゴキシンは、サポニン含有量のHPLC推定における内部標準として有用です。類似した構造と分子量を持つ異なる種のサポニンは、同様のキャリブレーション曲線を提供します。

INTRODUCTION: Saponins are widely distributed complex plant glycosides possessing a variety of structure-dependent bioactivities. Quantitation of individual saponins is difficult due to lack of available standards, mainly as a consequence of purification difficulties. Determination of total saponin content can be problematic, often relying on non-specific methods based on butanol solubility, haemolytic activity or formation of coloured derivatives. OBJECTIVE: To develop a general quantitative method based on the use of the readily available cardenolides, digitoxin (1) and digoxin (2), as internal standards in an HPLC-PAD-based analysis. METHODOLOGY: The cardenolides were run at a variety of concentrations to establish linearity and reproducibility of detector response and then evaluated as internal standards for quantitation of triterpene saponins in several plant-derived extracts by HPLC-PAD. Mixtures of saponins, largely freed from other extractables, were obtained by fractionation of total extracts on solid phase extraction columns (SPE) employing a water-methanol gradient and used for construction of calibration curves. Saponin identification and structural information was obtained via a single quadrupole mass detector using electrospray ionisation in negative ion mode (ESI(-)). RESULTS: Saponin contents in six samples from five species were determined and compared with literature results and a gravimetric method based on butanol-water partitioning. Results were generally consistent with literature reports and superior to gravimetric butanol-water partitioning. CONCLUSION: Digitoxin and digoxin are useful as internal standards in HPLC estimation of saponin content. Saponins from different species having similar structures and molecular weights afford similar calibration curves.