リシンの生物活性に対する食物マトリックスの効果

食品サンプル中のリシンの迅速な検出には、無細胞翻訳アッセイが適用されました。経済的に重要な3つの食品地上牛肉、低脂肪牛乳、液体鶏の卵がテストされました。結果は、牛ひき肉がアッセイにマトリックス効果がほとんどないのに対し、低脂肪ミルクと液体鶏の卵はタンパク質翻訳に明確な干渉を示したことを示した。リン酸緩衝生理食塩水（PBS）の単純な希釈により、これらの食品からの翻訳阻害が効果的に排除されました。現在の研究に由来するルシフェラーゼ翻訳の50％を阻害する濃度は、純粋なリシンA鎖で0.01 nm、純粋なリシンで0.02 nm、PBSの粗リシンで0.087 nmでした。ほとんどの場合、食物マトリックスのリシンの半分の阻害濃度値は、PBS緩衝液のリシンよりも有意に低かったため、これらの食品マトリックスの一部の成分がリシンの活性を増強する可能性があることを示唆しています。熱安定性テストは、測定されたすべてのマトリックスでリシンA鎖がリシンの3つの形態の中で最も安定していないことを示しました。純粋で粗いリシンの熱安定性は、マトリックスによって異なりました。PBS緩衝液中のリシンの特定の活性は、リシン特異的および非特異的抗体による中和試験によって確認されました。この研究は、細胞なしの翻訳アッセイが、牛ひき肉、低脂肪乳、液体鶏卵における生物学的に活性なリシン毒素を検出するための迅速で敏感な方法であり、リシンの熱安定性に大きな影響を与える可能性があることを示しています。

A cell-free translation assay was applied for the quick detection of ricin in food samples. Three economically important foods-ground beef, low-fat milk, and liquid chicken egg--were tested. The results indicated that ground beef had very little matrix effect on the assay, whereas low-fat milk and liquid chicken egg showed clear interference on the protein translation. A simple dilution in phosphate-buffered saline (PBS) effectively eliminated the translational inhibition from these foods. The concentrations inhibiting 50% of luciferase translation derived from the current study were 0.01 nM for the pure ricin A chain, 0.02 nM for pure ricin, and 0.087 nM for crude ricin in PBS. In most cases, the half inhibitory concentration values for ricin in food matrices were significantly lower than for those in PBS buffer, suggesting that some components in these food matrices might potentiate the activity of ricin. Thermal stability tests indicated that the ricin A chain was the least stable among the three forms of ricin in all matrices measured. The thermal stability of pure and crude ricins varied depending on the matrices. The specific activities of ricin in PBS buffer were confirmed by a neutralization test with ricin-specific and nonspecific antibodies. This study demonstrates that the cell-free translation assay is a rapid and sensitive method for detection of biologically active ricin toxin in ground beef, low-fat milk, and liquid chicken egg and that food matrices can greatly affect the thermal stability of ricin.