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Agrobacterium Tumefaciensを介した形質転換（ATMT）を使用して、臨床的に重要な皮膚糸状菌であるTrichophyton Mentagrophytes（Teleomorph：Arloderma vanbreuseghemii）への遺伝子移動を促進しました。ヒグロマイシンB耐性カセットを含むバイナリベクターをA. tumefaciensに導入し、結果として生じる株を真菌の小さな分生子と共培養しました。形質転換により、多数のヒグロマイシンB耐性形質転換体が得られました。ハイブリダイゼーション分析により、形質転換体のほとんどは、ゲノムにランダムに統合されたT-DNAの単一のコピーを抱いていることが示されました。転換頻度は、共栽培時間と温度を最適化することにより、10（7）分生子あたり200以上に増加しました。次に、ATMTは、相同組換えによって媒介される標的遺伝子破壊に使用されました。PCRベースの戦略を使用して、T。mentagrophytesから面積/NIT-2様窒素調節遺伝子（TNR：Trichophytonnitrogen Regulator）を分離しました。Hygromycin B耐性カセットに隣接するTNR遺伝子座の2つの領域を含むバイナリベクトルが構築され、T。mentagrophytesviaatmtに導入されました。面積/NIT-2様遺伝子（TNR）の破壊を伴う形質転換体は、4つの独立した破壊実験のうち3つで得られましたが、そのほとんどは破壊構築物の追加の異所性統合なしで二重クロスオーバーを介して相同組換えを示しました。
Agrobacterium Tumefaciensを介した形質転換（ATMT）を使用して、臨床的に重要な皮膚糸状菌であるTrichophyton Mentagrophytes（Teleomorph：Arloderma vanbreuseghemii）への遺伝子移動を促進しました。ヒグロマイシンB耐性カセットを含むバイナリベクターをA. tumefaciensに導入し、結果として生じる株を真菌の小さな分生子と共培養しました。形質転換により、多数のヒグロマイシンB耐性形質転換体が得られました。ハイブリダイゼーション分析により、形質転換体のほとんどは、ゲノムにランダムに統合されたT-DNAの単一のコピーを抱いていることが示されました。転換頻度は、共栽培時間と温度を最適化することにより、10（7）分生子あたり200以上に増加しました。次に、ATMTは、相同組換えによって媒介される標的遺伝子破壊に使用されました。PCRベースの戦略を使用して、T。mentagrophytesから面積/NIT-2様窒素調節遺伝子（TNR：Trichophytonnitrogen Regulator）を分離しました。Hygromycin B耐性カセットに隣接するTNR遺伝子座の2つの領域を含むバイナリベクトルが構築され、T。mentagrophytesviaatmtに導入されました。面積/NIT-2様遺伝子（TNR）の破壊を伴う形質転換体は、4つの独立した破壊実験のうち3つで得られましたが、そのほとんどは破壊構築物の追加の異所性統合なしで二重クロスオーバーを介して相同組換えを示しました。
Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation (ATMT) was used to facilitate gene transfer into the clinically important dermatophyte, Trichophyton mentagrophytes (teleomorph: Arthroderma vanbreuseghemii). A binary vector containing a hygromycin B resistance cassette was introduced into A. tumefaciens, and the resultant strain was co-cultivated with fungal small conidia. Transformation yielded a large number of hygromycin B-resistant transformants. Hybridization analysis showed that most of the transformants harboured a single copy of T-DNA randomly integrated into the genome. Transformation frequency was increased to more than 200 per 10(7) conidia by optimizing the co-cultivation time and temperature. ATMT was then used for targeted gene disruption mediated by homologous recombination. Using a PCR-based strategy, we isolated the areA/nit-2-like nitrogen regulatory gene (tnr:Trichophytonnitrogen regulator) from T. mentagrophytes. A binary vector containing two regions of the tnr locus flanking the hygromycin B resistance cassette was constructed and introduced into T. mentagrophytesvia ATMT. Transformants with disruption of the areA/nit-2-like gene (tnr) were obtained in three of four independent disruption experiments, most of which showed homologous recombination via double crossover without additional ectopic integration of the disruption construct.
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