水性2相抽出、疎水性相互作用クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーを組み合わせた抗体の精製のための統合プロセス

私たちは、中国のハムスター卵巣（CHO）細胞清清剤からのヒト免疫グロブリンG（IGG）の精製のために、水性2相抽出、疎水性相互作用クロマトグラフィー（HIC）およびサイズ排除クロマトグラフィ（SEC）を組み込んだプロセスを評価しました。これらのユニット操作は、ターゲットの不純物の除去を許可するだけでなく、条件付けステップを必要とせずに異なるプロセスユニットの統合を促進するためにも選択されました。ポリエチレングリコール（PEG）とクエン酸ナトリウムで構成される水性2相システム（ATPSS）の抽出により、クエン酸リッチ相の抗体の濃度とPEGリッチ相で最も疎水性化合物の除去が可能になりました。10％（w/w）PEG 3350および12％（w/w）クエン酸塩で構成されるATPは、pH 6で、97％の収率、41％のHPLC純度、72％のタンパク質純度でIgGの回収を可能にしました。次に、この底部位相をフェニルセファロースHICカラムに直接積み込みました。この中間精製ステップにより、86％のHPLC純度と91％のタンパク質純度で、抗体の99％が溶出率で回収されたクエン酸動移動相を使用して抗体を捕捉することができました。最後に、SECはIgG凝集体を除去することにより、最終的な研磨を許可しました。HIC eluted画分は、90％の収率で100％純粋なIgG溶液を提供する超節6サイズ排除カラムに直接注入されました。

We have evaluated a process incorporating aqueous two-phase extraction, hydrophobic interaction chromatography (HIC) and size-exclusion chromatography (SEC) for the purification of human immunoglobulin G (IgG) from a Chinese hamster ovary (CHO) cell supernatant. These unit operations were chosen not only for allowing the removal of target impurities but also for facilitating the integration of different process units without the need for any conditioning step. Extraction in aqueous two-phase systems (ATPSs), composed of polyethylene glycol (PEG) and sodium citrate, allowed the concentration of the antibodies in the citrate-rich phase and the removal of the most hydrophobic compounds in the PEG-rich phase. An ATPS composed of 10% (w/w) PEG 3350 and 12% (w/w) citrate, at pH 6, allowed the recovery of IgG with a 97% yield, 41% HPLC purity and 72% protein purity. This bottom phase was then directly loaded on a phenyl-Sepharose HIC column. This intermediate purification step allowed the capture of the antibodies using a citrate mobile phase with 99% of the antibody recovered in the elution fractions, with 86% HPLC purity and 91% protein purity. Finally, SEC allowed the final polishing by removing IgG aggregates. HIC-eluted fractions were directly injected in a Superose 6 size-exclusion column affording a 100% pure IgG solution with 90% yield.