子宮内脳室内注射とE16ラット胚のエレクトロポレーション

胚内注射と胚のラット新皮質のエレクトロポレーションは、外側心室の壁に並ぶ個々の前駆細胞を操作するための強力なツールを提供します。この手法は現在、遺伝子を過剰発現またはノックダウンし、細胞の増殖、移動、および分化に対する影響を観察することにより、皮質形成に関与するプロセスを研究するために広く使用されています。従来のノックアウト戦略と比較して、In-uteroのエレクトロポレーションは、特定の時間窓中に細胞の集団を操作する迅速な手段を提供します。このビデオプロトコルでは、ラットを手術用に準備し、子宮角を腹甲状腺術を通して露出させ、発達中の胚の外側心室にDNAを注入し、DNAを外側の壁に並べる前駆細胞にエレクトロポレーションを注入するための実験的方法論の概要を説明し、術後の動物のケアを概説します。。私たちの研究室は、このビデオに示すように、E15-E21ラットでこのプロトコルを使用していますが、E16で最も一般的に実行されます。

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic rat neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors lining the walls of the lateral ventricle. This technique is now widely used to study the processes involved in corticogenesis by over-expressing or knocking down genes and observing the effects on cellular proliferation, migration, and differentiation. In comparison to traditional knockout strategies, in-utero electroporation provides a rapid means to manipulate a population of cells during a specific temporal window. In this video protocol we outline the experimental methodology for preparing rats for surgery, exposing the uterine horns through laporatomy, injecting DNA into the lateral ventricles of the developing embryo, electroporating DNA into the progenitors lining the lateral wall, and caring for animals post-surgery. Our laboratory uses this protocol for surgeries on E15-E21 rats, however it is most commonly performed at E16 as shown in this video.