Cupriavidus MetalliduransのMerrファミリープロモーターの転写活性化CH34

金属応答性のMerrファミリー転写調節因子は、細菌において細菌に広がっており、細胞質における同族の金属種の存在に応じて、金属イオン解毒、排出、または恒常性に関与する遺伝子の転写を活性化します。MERRファミリーの調節因子は、他のSigma（70）依存性プロモーターの標準的な16-18 bpスペーサーよりも長い-35と-10シーケンスの間にスペーサー領域を持つ特定のプロモーターのDyad対称性DNA配列を認識して結合します。この研究では、複数の金属耐性菌虫菌におけるMERRファミリー制御遺伝子発現のベータガラクトシダーゼアッセイを報告します。クローン化されたMERRファミリー活性化プロモーターを含む一連のPMU2385レポータープラスミド誘導体を使用して、異なるMERRファミリー調節プロモーターからの金属イオン誘導反応を決定し、同様にPMU2385に同種のプロモーターとともにクローン化されました。水銀イオン応答MERRおよび鉛イオン応答性PBRR活性は、このアッセイシステムと、それぞれのエセリチア大腸菌、PCADA、およびPZCCのMERRファミリー活性化因子活性を使用して確認されました。C. Metallidurans Ch34では、これらのプロモーターからの転写は、銅（PCOPA）に応答して染色体またはメガプラスミドにコードされたMERRファミリーレギュレーターによって活性化され、C。metalliduransのMerrファミリーアクティベーターが作用することを示しています。他の生物からのMerrファミリープロモーターは、予測されたC.メタリドゥランのプロモーターに配列の違いがあります。

Metal responsive MerR family transcriptional regulators are widespread in bacteria and activate the transcription of genes involved in metal ion detoxification, efflux, or homeostasis, in response to the presence of cognate metal species in the cytoplasm. MerR family regulators recognize and bind to dyad symmetrical DNA sequences in specific promoters that have a spacer region between the -35 and -10 sequences which is longer than the canonical 16-18 bp spacer for other sigma(70)-dependent promoters. In this study we report beta-galactosidase assays of MerR family-regulated gene expression in the multiple metal resistant bacterium Cupriavidus metallidurans. A series of pMU2385 reporter plasmid derivatives containing cloned MerR family-activated promoters were used to determine metal ion-induced responses from different MerR family regulated promoters, as well as regulators cloned with the cognate promoter into pMU2385. Mercuric ion-responsive MerR and lead ion-responsive PbrR activity was confirmed using this assay system as well as MerR family activator activity on heterologous promoters PcopA, PcadA, and Pzcc from Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Bordetella pertussis, respectively. In C. metallidurans CH34, transcription from these promoters was activated by MerR family regulators encoded on the chromosome or megaplasmids in response to copper (PcopA), and lead (PcadA and PzccA), showing that MerR family activators in C. metallidurans can act on MerR family promoters from other organisms, which have sequence differences to the predicted C. metallidurans promoters.