32キロダルトンタンパク質は、急速に劣化したmRNAの3 '翻訳されていない領域のAuリッチドメインに結合します

3 '翻訳されていない領域内に存在するAUリッチシーケンスは、急速な分解のために短命のmRNAをマークすることが示されています。核抽出物に存在する32 kDAポリペプチドが、ヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、C-FOS、C-FOS、およびC-Myc MRNAの追加ドメインを追加したドメインを追加します。競合実験と部分的なプロテアーゼ分析により、同じポリペプチドが4つのRNAすべてと相互作用することが示されました。Uリッチなコンテキストでの単一のAUUUAシーケンスは、32 kDaポリペプチドの結合を信号にするのに十分でした。この最小認識部位の3つのコピーの挿入により、ベータグロビンRNAの蓄積が著しく減少しましたが、一連のU-g変化を担う同じ挿入では、RNAレベルにほとんど影響がありませんでした。不完全に処理されたRNA、および細胞質mRNAを含むベータグロビン特異的核RNAの定常状態レベルが減少しました。32 kDaポリペプチドのAuリッチ認識部位を含む細胞質mRNAは、変異した挿入物を持つmRNAの半減期よりも半減期が短いことを示しました。32 kDaポリペプチドの結合がmRNA半減期の調節に関与する可能性があることをお勧めします。

An AU-rich sequence present within the 3' untranslated region has been shown to mark some short-lived mRNAs for rapid degradation. We demonstrate by label transfer and gel shift experiments that a 32-kDa polypeptide, present in nuclear extracts, specifically interacts with the AU-rich domains present within the 3' untranslated region of human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, c-fos, and c-myc mRNAs and a similar domain downstream of the poly(A) addition site of the adenovirus IVa2 mRNA. Competition experiments and partial protease analysis indicated that the same polypeptide interacts with all four RNAs. A single AUUUA sequence in a U-rich context was sufficient to signal binding of the 32-kDa polypeptide. Insertion of three copies of this minimal recognition site led to markedly reduced accumulation of beta-globin RNA, while the same insert carrying a series of U-to-G changes had little effect on RNA levels. Steady-state levels of beta-globin-specific nuclear RNA, including incompletely processed RNA, and cytoplasmic mRNA were reduced. Cytoplasmic mRNA containing the AU-rich recognition sites for the 32-kDa polypeptide exhibited a half-life shorter than that of mRNA with a mutated insert. We suggest that binding of the 32-kDa polypeptide may be involved in the regulation of mRNA half-life.