5-ニトロイミダゾール薬物とそれらの対応するヒドロキシ代謝産物の同定と定量化のための液体クロマトグラフィタンデム質量分析法の検証

候補認定参照資料の選択された形式である凍結乾燥豚肉における5-ニトロイミダゾール獣医薬の同時検出と定量のための液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析法が開発および検証されました。6つの分析物が検証の範囲に含まれています。すなわち、ジメトリダゾール（DMZ）、メトロニダゾール（MNZ）、ロニダゾール（RNZ）、ヒドロキシメトロニダゾール（MNZOH）、ヒドロキシプロニダゾール（IPZOH）、および2-ヒドロキシメチルメチル型（IPZOH）、および2-ヒドロキシプロニダゾール（うーん）。分析対象物は、酢酸エチルでサンプルから抽出され、C（18）カラムでクロマトグラフィー分離され、最終的にマトリックスマッチングカリブレーションと（2）H（2）H（3） - 分析物の標識類似体（mnzohを除く、[（2）H（3）] MNZが使用された）。この方法は、選択性、線形性、マトリックス効果、見かけの回復、再現性と中間精度、決定制限と検出機能、サンプル調製方法の堅牢性、および抽出物の安定性を決定することにより、委員会の決定2002/657/ECに従って検証されました。1マイクログ/kgレベルでの回復は、すべての分析物の100％（101-107％の範囲の推定値）であり、このレベルでの繰り返しと中間の精度はそれぞれ4〜12％と2-9％の範囲でした。0.5〜10マイクログ/kgの作業範囲でのキャリブレーション曲線の直線性が確認され、R値は通常0.99> 0.99でした。ISO 11843-2（キャリブレーション曲線アプローチ）に従って、決定制限（CCALPHA）および検出機能（CCBETA）は、それぞれ0.29-0.44および0.36-0.54マイクログ/kgでした。この方法は、再構成された豚肉肉の選択されたニトロイミダゾールを低およびサブマイクログ/kgの範囲で確実に識別し、定量化し、現在IRMMで開発された候補参照資料で選択されたニトロイミダゾールの質量画分を決定するために、ラボン間比較に適用されます。。

A liquid chromatography-electrospray ionisation tandem mass spectrometry method for the simultaneous detection and quantitation of 5-nitroimidazole veterinary drugs in lyophilised pork meat, the chosen format of a candidate certified reference material, has been developed and validated. Six analytes have been included in the scope of validation, i.e. dimetridazole (DMZ), metronidazole (MNZ), ronidazole (RNZ), hydroxymetronidazole (MNZOH), hydroxyipronidazole (IPZOH), and 2-hydroxymethyl-1-methyl-5-nitroimidazole (HMMNI). The analytes were extracted from the sample with ethyl acetate, chromatographically separated on a C(18) column, and finally identified and quantified by tandem mass spectrometry in the multiple reaction monitoring mode (MRM) using matrix-matched calibration and (2)H(3)-labelled analogues of the analytes (except for MNZOH, where [(2)H(3)]MNZ was used). The method was validated in accordance with Commission Decision 2002/657/EC, by determining selectivity, linearity, matrix effect, apparent recovery, repeatability and intermediate precision, decision limits and detection capabilities, robustness of sample preparation method, and stability of extracts. Recovery at 1 microg/kg level was at 100% (estimates in the range of 101-107%) for all analytes, repeatabilities and intermediate precisions at this level were in the range of 4-12% and 2-9%, respectively. Linearity of calibration curves in the working range 0.5-10 microg/kg was confirmed, with r values typically >0.99. Decision limits (CCalpha) and detection capabilities (CCbeta) according to ISO 11843-2 (calibration curve approach) were 0.29-0.44 and 0.36-0.54 microg/kg, respectively. The method reliably identifies and quantifies the selected nitroimidazoles in the reconstituted pork meat in the low and sub-microg/kg range and will be applied in an interlaboratory comparison for determining the mass fraction of the selected nitroimidazoles in the candidate reference material currently developed at IRMM.