Phrodo cuscinimidylエステルを使用したマクロファージによるアポトーシス細胞の巻き込みを決定する新しい方法

アポトーシス細胞の食作用は、特にその複雑な分子メカニズムとアポトーシス細胞の無能なクリアランスの負の免疫学的影響により、最近かなりの関心を高めました。アポトーシス細胞の内在化を明確に決定するための単純で信頼できる方法が必要です。pH感受性蛍光色素であるPhrodo coucinimidyl Ester（SE）との標識は、門腺細胞の光放出の増加により、飲み込まれたアポトーシス細胞を検出可能にします。これは、FACSを介した食作用研究のための貴重なツールです。アポトーシスのphrodo標識リンパ球を獲物および抗CD11b標識組織マクロファージとして使用して、ex vivoアッセイを設計しました。内部化されたアポトーシスリンパ球を検出するという妥当性を実証するために、食作用能力の障害があることが知られているMFGE8（ - / - ）マクロファージを使用しました。アポトーシスリンパ球の摂取は、組換えMFGE8による刺激後の脾臓マクロファージで加速され、増強されましたが、腹膜マクロファージは遅延した取り込みを補うことができました。この新しいアッセイは、アポトーシス細胞の内在化を評価するための迅速で信頼できる方法です。

Apoptotic cell phagocytosis has recently raised considerable interest, particularly due to its intricate molecular mechanisms and negative immunologic impact of incompetent clearance of apoptotic cells. There is a need for simple and reliable methods to clearly determine the internalization of apoptotic cells. Labeling with pHrodo succinimidyl ester (SE), a pH-sensitive fluorescent dye, makes engulfed apoptotic cells detectable due to the increased post-phagocytic light emission. This is a valuable tool for phagocytosis studies via FACS. We designed an ex vivo assay, using apoptotic pHrodo-labeled lymphocytes as prey and anti-CD11b-labeled tissue macrophages. To demonstrate its validity of detecting internalized apoptotic lymphocytes, we used MFGE8(-/-) macrophages, known to have impaired phagocytic ability. Uptake of apoptotic lymphocytes was accelerated and enhanced in splenic macrophages after stimulation with recombinant MFGE8, while peritoneal macrophages were able to compensate for the delayed uptake. This novel assay is a quick and reliable method to evaluate the internalization of apoptotic cells.