in vivoにおける酸化ストレス誘発性肝障害：アポトーシス、腫瘍壊死、およびC-Jun NH2末端キナーゼ活性化の役割

酸化ストレスは、さまざまな肝疾患に非常に関与しています。スーパーオキシド形成により、培養肝細胞におけるC-Jun NH2末端キナーゼ（JNK）およびカスパーゼ依存性アポトーシスが引き起こされます。in vivoでのこれらの発見を検証するために、雄の漁師ラットはジクートとメナディオンで治療されました。両方の化合物によって誘発される酸化剤ストレスは、ジスルフィドグルタチオンと4-ヒドロキシノネナールタンパク質付加物の形成の増加によって確認されました。プラズマアラニンアミノトランスフェラーゼ活性は、金融処理後6時間でコントロールの46 +/- 4 U/Lから955 +/- 90 U/Lに増加しました。肝臓切片のヘマトキシリンとエオシン染色により、3時間と6時間で壊死細胞の大きな領域が明らかになりました。末端デオキシヌクレオチジル媒介Dutpニックエンド標識（Tunel）アッセイで評価されたDNAストランドブレイクは、染色が主にサイトゾルであり、細胞が腫れていて、発癌性壊死を示すTunel陽性細胞のクラスターを示しました。ジック処理後0〜6時間の間に、カスパーゼ-3活性の有意な増加や細胞ゾルへのDNA断片の関連する放出はありませんでした。高用量のジクタット後のJNKの活性化にもかかわらず、JNK阻害剤SP-600125は、ジクタ誘発壊死から保護しませんでした。メナディオーネだけでは肝臓損傷を引き起こしませんでしたが、フォロンとFESO4との組み合わせにより、中程度の腫瘍性壊死を誘発しました。一方、アポトーシスの陽性対照として動物をガラクトサミン/エンドトキシンで処理した場合、カスパーゼ-3活性は259％増加し、アポトーシス形態を伴うTUNEL陽性細胞の数が103倍増加し、DNA断片化が増加しました。6倍。データは、in vivoでのジカット誘発性スーパーオキシド形成によって開始された肝細胞死は、主に癌性壊死によって媒介され、JNK活性化とは無関係であることを示しています。

Oxidant stress is critically involved in various liver diseases. Superoxide formation causes c-Jun NH2-terminal kinase (JNK)- and caspase-dependent apoptosis in cultured hepatocytes. To verify these findings in vivo, male Fisher rats were treated with diquat and menadione. The oxidant stress induced by both compounds was confirmed by increased formation of glutathione disulfide and 4-hydroxynonenal protein adducts. Plasma alanine aminotransferase activities increased from 46+/-4 U/l in controls to 955+/-90 U/l at 6 h after diquat treatment. Hematoxylin and eosin staining of liver sections revealed large areas of necrotic cells at 3 and 6 h. DNA strandbreaks, evaluated with the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) assay, showed clusters of TUNEL-positive cells, where the staining was predominantly cytosolic and the cells were swollen, indicating oncotic necrosis. There was no significant increase in caspase-3 activities or relevant release of DNA fragments into the cytosol at any time between 0 and 6 h after diquat treatment. Despite the activation of JNK after high doses of diquat, the JNK inhibitor SP-600125 did not protect against diquat-induced necrosis. Menadione alone did not cause liver injury, but, in combination with phorone and FeSO4, induced moderate oncotic necrosis. On the other hand, if animals were treated with galactosamine/endotoxin as positive control for apoptosis, caspase-3 activities were increased by 259%, the number of TUNEL-positive cells with apoptotic morphology was increased 103-fold, and DNA fragmentation was enhanced 6-fold. The data indicate that liver cell death initiated by diquat-induced superoxide formation in vivo is mediated predominantly by oncotic necrosis and is independent of JNK activation.