キメラタンパク質G α qi5を介したカルシウムシグナル伝達と共役したNOP受容体の薬理学的プロファイル

この研究では、Galpha(qi5) タンパク質を使用して、ヒト ノシセプチン/オルファニン FQ (N/OFQ) ペプチド (NOP) 受容体に CHO 細胞の Ca(2+) 経路を介したシグナル伝達を強制しました。[Ca(2+)](i) レベルは、蛍光光度計 FlexStation II および Ca(2+) 色素 Fluo 4 AM を使用してモニタリングしました。濃度応答曲線は完全アゴニストと部分アゴニストのパネルを使用して作成され、NOP アンタゴニストは阻害応答曲線で評価されました。アンタゴニストの効力の次の順位が測定されました: SB - 612111 > J - 113397 = Trap - 101 > または = UFP - 101 > [Nphe1]N/OF Q(1 - 13)NH2 >> ナロキソン。これは文献結果と重ね合わせることができます。完全アゴニストおよび部分アゴニストの効力の順位も、Galpha(qi5)-NOP 受容体カルシウムアッセイにおいて効力が比較的低かったリガンドのパネル (UFP-112、Ro 64-6198、ZP120、UFP-113) を除いて、以前の研究で得られたものと類似しています。興味深いことに、バイオアッセイ実験で実証されたように、これらの NOP リガンドは NOP 受容体との相互作用速度が遅いという特徴があります。これらの結果は、FlexStation II-Galpha(qi5)-NOP 受容体カルシウムアッセイが NOP 受容体リガンド、特にアンタゴニストの適切かつ有用なスクリーニングであることを実証しました。

In this study, the Galpha(qi5) protein was used to force the human nociceptin/orphanin FQ (N/OFQ) peptide (NOP) receptor to signal through the Ca(2+) pathway in CHO cells. [Ca(2+)](i) levels were monitored using the fluorometer FlexStation II and the Ca(2+) dye Fluo 4 AM. Concentration response curves were generated with a panel of full and partial agonists, while NOP antagonists were assessed in inhibition-response curves. The following rank order of potency of antagonists was measured: SB - 612111 > J - 113397 = Trap - 101 > or = UFP - 101 > [Nphe1]N/OF Q(1 - 13)NH2 >> naloxone, which is superimposable to literature findings. The rank order of potency of full and partial agonists is also similar to that obtained in previous studies with the exception of a panel of ligands (UFP-112, Ro 64-6198, ZP120, UFP-113) whose potency was relatively low in the Galpha(qi5)-NOP receptor calcium assay. Interestingly, these NOP ligands are characterized by slow kinetic of interaction with the NOP receptor, as demonstrated by bioassay experiments. These results demonstrated that the FlexStation II-Galpha(qi5)-NOP receptor calcium assay represents an adequate and useful screening for NOP receptor ligands, particularly for antagonists.