PHI29 DNAポリメラーゼの新規散布：標的RNAプライミングRCAによるin vitroおよびその場でのRNA検出と分析

RCAベースの標的RNA検出と分析における新しいPHI29 DNAポリメラーゼアプリケーションを提示します。PHI29 DNAポリメラーゼの3 ' - > 5' RNase活性は、標的RNAをプライマーに変換し、ポリメラーゼはこの新しく生成されたプライマーをRCA開始に使用します。したがって、ターゲットRNAプライミングRCAを使用して、パドロックプローブは内部RNA配列を標的とする場合があり、それらの特性を直接分析できます。PHI29 DNAポリメラーゼのエクソリボヌクレリ溶解活性は、in vitroおよびその場で正常に適用できることを実証します。これらの発見は、3'エンドから距離を置いたRNA配列の検出と分析の可能性を拡大します。

We present a novel Phi29 DNA polymerase application in RCA-based target RNA detection and analysis. The 3'-->5' RNase activity of Phi29 DNA polymerase converts target RNA into a primer and the polymerase uses this newly generated primer for RCA initiation. Therefore, using target RNA-primed RCA, padlock probes may be targeted to inner RNA sequences and their peculiarities can be analyzed directly. We demonstrate that the exoribonucleolytic activity of Phi29 DNA polymerase can be successfully applied in vitro and in situ. These findings expand the potential for detection and analysis of RNA sequences distanced from 3'-end.