治療抗体とその抗原は、リン酸緩衝生理食塩水とは異なる血清の異なる複合体を形成します：分析的超遠心分離による研究

タンパク質治療の開発中に、薬物の安定性、安全性、有効性を確保するために、活性医薬品成分の特性評価が広範囲に実行されます。しかし、血液中に循環するタンパク質薬の特徴についてはほとんど知られていない。分析的超遠心分離（AUC）機器における蛍光検出システム（FDS）の最近の利用可能性により、生物液中の蛍光標識タンパク質の特性評価が可能になります。AUCは、サイズの除外クロマトグラフィーに関連する多くの制限を避けながら、タンパク質のサイズ、形状、自己関連、結合に関する情報を提供します。さらに、FDSの特異性と感度により、血清中の生理学的濃度で測定を実行できます。現在の研究では、抗免疫グロブリンE（IgE）モノクローナル抗体であるオマリズマブを使用して、モノクローナル抗体とその複合体の研究にAUC-FDSを使用する可能性を実証しました。オマリズマブの特性は、蛍光色素Alexa Fluor 488で標識した後、本質的に変更されていませんでした。さらに、オマリズマブとIgEは、サイズと親和性の両方の点で、リン酸緩衝生理食塩水よりも血清中の異なる複合体を形成しました。

During the development of protein therapeutics, characterization of the active pharmaceutical ingredient is performed extensively to ensure the stability, safety, and efficacy of the drug. Little is known, however, about the characteristics of protein drugs circulating in the blood. The recent availability of a fluorescence detection system (FDS) in analytical ultracentrifugation (AUC) instruments enables the characterization of fluorescently labeled proteins in biological fluids. AUC provides information about protein size, shape, self-association, and binding while avoiding many limitations associated with size exclusion chromatography. Furthermore, with the specificity and sensitivity of FDS, measurements can be performed at physiological concentrations directly in serum. In the current study, we used omalizumab, an anti-immunoglobulin E (IgE) monoclonal antibody, to demonstrate the potential of using AUC-FDS for the study of a monoclonal antibody and its complexes directly in human serum. Omalizumab properties were essentially unaltered after labeling with the fluorescent dye Alexa Fluor 488. In addition, omalizumab and IgE formed different complexes in serum than in phosphate-buffered saline in terms of both size and affinity.