蛍光タンパク質の実用的で信頼できるFRET/FLIMペア

背景：近年開発された多数の単量体蛍光タンパク質にもかかわらず、報告されている蛍光タンパク質ベースのFRETペアは、細胞生物学の記者としての使用を複雑にし、高スループット細胞のために使用する多くの不利な特徴によってまだ特徴付けられています。 - ベースのスクリーニング。 結果：ここでは、最近開発されたモノマータンパク質ペアの一部をスクリーニングして、最適な組み合わせを見つけました。これは、高いダイナミックレンジフレットの変化を提供し、高いpHおよび光安定性、高速成熟と明るい蛍光、および蛍光の信頼できる検出を提供します。イメージングシステム。生成されたFRETペアの中で、上記のすべての望ましい特性を組み合わせてTAGGFP-TAGRFPを選択しました。この非常に効率的なFRETペアに基づいて、CASPER3（カスパーゼ3レポーター）という名前の明るく高コントラスト、pHおよび光安定性アポトーシスレポーターを生成しました。 結論：組み合わせた利点は、TAGGFP-TAGRFPが、生細胞の関心のあるタンパク質の相互作用を監視し、さまざまなアプリケーションのFRETベースのセンサーを生成するために、FRET/FLIM分析に利用できる最も効率的な緑/赤いカップルの1つであることを示唆しています。CASPER3は、アポトーシスの信頼できる検出を提供し、細胞生物学研究と高スループットスクリーニングアッセイの両方で人気のあるツールになるはずです。

BACKGROUND: In spite of a great number of monomeric fluorescent proteins developed in the recent years, the reported fluorescent protein-based FRET pairs are still characterized by a number of disadvantageous features, complicating their use as reporters in cell biology and for high-throughput cell-based screenings. RESULTS: Here we screened some of the recently developed monomeric protein pairs to find the optimal combination, which would provide high dynamic range FRET changes, along with high pH- and photo-stability, fast maturation and bright fluorescence, and reliable detection in any fluorescent imaging system. Among generated FRET pairs, we have selected TagGFP-TagRFP, combining all the mentioned desirable characteristics. On the basis of this highly efficient FRET pair, we have generated a bright, high contrast, pH- and photo-stable apoptosis reporter, named CaspeR3 (Caspase 3 Reporter). CONCLUSION: The combined advantages suggest that the TagGFP-TagRFP is one of the most efficient green/red couples available to date for FRET/FLIM analyses to monitor interaction of proteins of interest in living cells and to generate FRET-based sensors for various applications. CaspeR3 provides reliable detection of apoptosis, and should become a popular tool both for cell biology studies and high throughput screening assays.