凍結後に沈殿した尿中堆積物の特性と尿タンパク質と化学分析への影響

凍結した尿サンプルを分析する際の障害の1つは、特徴づけられていない沈殿物の形成です。多くの場合、これらの沈殿物は分析前に破棄されます。これらの沈殿物に重要な化合物が含まれている場合、一部の実験室データは誤っている場合があります。本研究では、-20度Cで一晩貯蔵後に沈殿した尿堆積物を調べました。凍結する前に細胞と破片を除去したが、沈殿物は残っていたが、4度Cで一晩貯蔵すると沈殿した尿は沈殿しなかった。10人の健康な個人（5人の男性と5人の女性）の間に有意差は観察されませんでした。EDTA（5 mm）は、沈殿物の量を初期量の約25％に効率的に減らすことができました。シュウ酸ナト​​リウムとNaClではなく、外因性CACL2の添加は、用量依存的に沈殿物の量を大幅に増加させました。線形回帰分析により、内因性尿中カルシウムレベルと沈殿物の量との間に有意な相関が明らかになりました（r = 0.894; p <0.001）。また、尿のpHは、沈殿物の種類と量にもいくつかの影響を及ぼしました。これらの沈殿物は、主にシュウ酸カルシウム二水和物とアモルファスカルシウム結晶で構成されていました。結果はまた、これらの沈殿物が尿タンパク質とカルシウムイオンを枯渇させる可能性があることを示した（23.6 +/- 1.1％減少）。したがって、これらのフリーザー誘発性尿堆積物は、尿中のタンパク質分析とカルシウムレベルの測定に大きく影響します。ただし、室温でサンプルを激しく振とうと、これらの沈殿物を再溶解する可能性があります。我々のデータは、凍結した尿サンプルを分析したときに、これらの冷凍剤誘発沈殿物を考慮に入れなければならないことを強く示しています。

One of the obstacles in analyzing frozen urine samples is the formation of uncharacterized precipitates. Frequently, these precipitates are discarded before analysis. Some laboratory data may be erroneous if these precipitates contain important compounds. In the present study, we examined urinary sediments precipitated after overnight storage at -20 degrees C. Although cells and debris were removed before freezing, the precipitates remained, whereas storing the centrifuged urine overnight at 4 degrees C did not result in precipitate formation. There were no significant differences observed among 10 healthy individuals (5 men and 5 women). EDTA (5 mM) could efficiently reduce the amount of precipitates to approximately 25% of the initial amount. The addition of exogenous CaCl2, but not sodium oxalate and NaCl, significantly increased the amount of precipitates in a dose-dependent manner. Linear regression analysis revealed a significant correlation between endogenous urinary calcium level and the amount of precipitates (r = 0.894; P < 0.001). Urine pH also had some effects on the type and amount of precipitates. These precipitates were composed mainly of calcium oxalate dihydrate and amorphous calcium crystals. The results also showed that these precipitates could deplete urinary proteins and calcium ions (23.6 +/- 1.1% decrease). Therefore, these freezer-induced urinary sediments significantly affect protein analysis and measurement of calcium levels in the urine. However, vigorous shaking of the sample at room temperature could redissolve these precipitates. Our data strongly indicate that these freezer-induced precipitates must be taken into account when the frozen urine samples are analyzed.