全細胞標識のためのDSRED-Express2の非セト毒性オレンジと赤/緑の誘導体

背景：全細胞標識は蛍光タンパク質（FPS）の一般的な用途ですが、多くの赤とオレンジ色のFPSは、全細胞ラベルとしての使用を制限する細胞毒性を示します。最近、dsred-express2と呼ばれる四量体赤FPが溶解度を高めるために設計され、細菌および哺乳類細胞では非セト毒性があることが示されました。私たちの目標は、異なるスペクトル特性を持つこのタンパク質の誘導体を作成することでした。 結果：DSRED変異体の以前の研究に基づいて、2つのDSRED-Express2誘導体を作成しました：E2-Orange、Orange FP、およびE2-RED/Green、赤い発光と緑色の両方の放射を持つデュアルカラーFP。これらの新しいFPSは、DSRED-Express2の低い細胞毒性を保持していることを示します。さらに、これらの新しいFPSは、フローサイトメトリーおよび蛍光顕微鏡の2番目または3番目の色として有用であることを示しています。 結論：E2-オレンジとE2-RED/GREENは、マルチカラー標識研究のための健康で安定して蛍光細胞株とトランスジェニック生物の生産を促進します。

BACKGROUND: Whole-cell labeling is a common application of fluorescent proteins (FPs), but many red and orange FPs exhibit cytotoxicity that limits their use as whole-cell labels. Recently, a tetrameric red FP called DsRed-Express2 was engineered for enhanced solubility and was shown to be noncytotoxic in bacterial and mammalian cells. Our goal was to create derivatives of this protein with different spectral properties. RESULTS: Building on previous studies of DsRed mutants, we created two DsRed-Express2 derivatives: E2-Orange, an orange FP, and E2-Red/Green, a dual-color FP with both red and green emission. We show that these new FPs retain the low cytotoxicity of DsRed-Express2. In addition, we show that these new FPs are useful as second or third colors for flow cytometry and fluorescence microscopy. CONCLUSION: E2-Orange and E2-Red/Green will facilitate the production of healthy, stably fluorescent cell lines and transgenic organisms for multi-color labeling studies.