定量化範囲が増加すると、半定量的なウエスタンブロット技術が改善されました

システム生物学などの新しい学際的分野の開発により、生物学的サンプルにおけるタンパク質発現の定量分析はますます重要になります。これの最も一般的な方法はELISAですが、ウエスタンブロットにも利点があります。サイズごとにタンパク質を分離すると、特異的に結合したタンパク質のみの評価が可能になります。この作業では、ウエスタンブロットシグナルチェーンを調べ、定量分析に関連するパラメーターの一部を決定し、反応速度論の数学的モデルを提案します。このモデルを使用して、双曲線キャリブレーション曲線を使用して異なるタンパク質を同時に定量化するための半定量的なウエスタンブロット法が開発されました。プログラムは、キャリブレーション曲線係数を迅速に決定できる双曲線回帰を目的として作成されました。このプログラムは、ELISA、BCA、Bradfordアッセイなどの他のアプリケーションでのキャリブレーション曲線の近似にも使用できます。

With the development of new interdisciplinary fields such as systems biology, the quantitative analysis of protein expression in biological samples gains more and more importance. Although the most common method for this is ELISA, Western blot also has advantages: The separation of proteins by size allows the evaluation of only specifically bound protein. This work examines the Western blot signal chain, determines some of the parameters relevant for quantitative analysis and proposes a mathematical model of the reaction kinetics. Using this model, a semiquantitative Western blot method for simultaneous quantification of different proteins using a hyperbolic calibration curve was developed. A program was written for the purpose of hyperbolic regression that allows quick determination of the calibration curve coefficients. This program can be used also for approximation of calibration curves in other applications such as ELISA, BCA or Bradford assays.