ライブゼブラフィッシュにおけるCREおよびFLP活性の視覚化のためのフレックスベースのトランスジェニックレポーターライン

CREやFLPなどの部位固有のリコンビナーゼは、遺伝子操作のための非常に貴重なツールですが、ゼブラフィッシュでの使用は限られています。安定した反転を可能にする最近開発されたFlip-Excision（Flex）設計を組み込むと、明るく遍在するEGFPを表現するゼブラフィッシュレポーターラインを確立しましたが、CREまたはFLPの存在下でMCHERRYを表現するように切り替えました。ここでは、体細胞とCREまたはFLPによる生殖系統の両方で、レポーター系統の安定した反転、および他のリコンビナーゼを使用したその後の再溶融を示します。レポーター系統を使用して、心筋細胞特異的CRE系統とニューロン前駆細胞特異的およびタモキシフェン依存性CRE系統を特徴づけました。また、CREおよびFLPベースのエンハンサートラップラインをスクリーニングするためにレポーターラインを使用しました。マウスで広く使用されているCREレポーター系統と同様に、これらのフレックスベースのレポーター系統は、ゼブラフィッシュの遺伝子操作のためにリコンビナーゼの使用を促進します。

Site-specific recombinases such as Cre and Flp are invaluable tools for genetic manipulations, but their usage in zebrafish has been limited. Incorporating recently developed flip-excision (FlEx) design that allows stable inversions, we have established zebrafish reporter lines that express bright and ubiquitous EGFP, but switch to express mCherry in the presence of Cre or Flp. Here, we demonstrate the stable inversion in the reporter lines, both in somatic cells and in the germ line by Cre or Flp, and the subsequent reinversion using the other recombinase. Using the reporter lines, we characterized cardiomyocyte-specific Cre lines and neuronal progenitor-specific and tamoxifen-dependent Cre lines. We also used the reporter lines for screening Cre- and Flp-based enhancer trap lines. Similar to the widely used Cre reporter lines in mice, these FlEx-based reporter lines will facilitate the use of recombinases for genetic manipulations in zebrafish.