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低温差FTIR分光法を適用して、青色光励起（<480 nm）でM中間体から生成された中間体を調査しました。低温可視吸収分光光度測定を伴うこれらの中間体を研究したBalashov and Litvin（1981）による以前の報告と一致して、このバックフォトローションで少なくとも3つの段階が観察されました。初期光生成物は100 Kで安定しており、温度をそれぞれ130 Kと160 Kに上げると、その後の熱反応の2つの生成物が観察されます。シッフ塩基のC = Nストレッチモードの変化は、網膜クロモフォアを等型に標識することによって特定されており、C = Oストレッチモードの変化が酸性鎖のアミノ酸耐性を持つ酸性耐石の変化によって特定されています。C = nストレッチングモードの分析は、100 Kでの光化学反応の後、シッフベースが非プロトン化されたままであることを示しています。さらに、おそらく異なるBR種に関連する2つのタイプのシッフ塩基があり、それぞれ130 Kと160 Kで熱的に再配置されます。C = oストレッチモードに関連するバンドは、ASP 96ではなくASP 85がMからBRバックフォトアーションの間にシッフベースを再発性することを示唆しています。この結論は、この光化学逆反応中の電気信号の極性が、MからのBRの熱再形成と比較して逆転するという以前の観察と一致しています。
低温差FTIR分光法を適用して、青色光励起（<480 nm）でM中間体から生成された中間体を調査しました。低温可視吸収分光光度測定を伴うこれらの中間体を研究したBalashov and Litvin（1981）による以前の報告と一致して、このバックフォトローションで少なくとも3つの段階が観察されました。初期光生成物は100 Kで安定しており、温度をそれぞれ130 Kと160 Kに上げると、その後の熱反応の2つの生成物が観察されます。シッフ塩基のC = Nストレッチモードの変化は、網膜クロモフォアを等型に標識することによって特定されており、C = Oストレッチモードの変化が酸性鎖のアミノ酸耐性を持つ酸性耐石の変化によって特定されています。C = nストレッチングモードの分析は、100 Kでの光化学反応の後、シッフベースが非プロトン化されたままであることを示しています。さらに、おそらく異なるBR種に関連する2つのタイプのシッフ塩基があり、それぞれ130 Kと160 Kで熱的に再配置されます。C = oストレッチモードに関連するバンドは、ASP 96ではなくASP 85がMからBRバックフォトアーションの間にシッフベースを再発性することを示唆しています。この結論は、この光化学逆反応中の電気信号の極性が、MからのBRの熱再形成と比較して逆転するという以前の観察と一致しています。
We have applied low temperature difference FTIR spectroscopy to investigate intermediates produced from the M intermediate upon blue light excitation (<480 nm). In agreement with an earlier report by Balashov and Litvin (1981), who studied these intermediates with low temperature visible absorption spectrophotometry, we have observed at least three stages in this backphotoreaction. The initial photoproduct is stable at 100 K, and two products of subsequent thermal reactions are observed upon raising the temperature to 130 and 160 K, respectively.The alterations in the C=N stretching mode of the Schiff base have been identified by isotopically labeling the retinal chromophore, and changes in C=O stretching modes of amino acid residues with acidic side chains have been investigated. Analysis of the C=N stretching mode shows that the Schiff base remains unprotonated after the photochemical reaction at 100 K. Moreover, there are two types of Schiff bases, presumably associated with different bR species, that become thermally reprotonated at 130 and 160 K, respectively. Bands associated with the C=O stretching modes suggest that Asp 85 rather than Asp 96 reprotonates the Schiff base during the M to bR backphotoreaction. This conclusion is consistent with earlier observations that the polarity of electrical signals during this photochemical back reaction is reversed as compared to the thermal regeneration of bR from M.
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