CUGBP2はU2 17S SNRNPコンポーネントと直接相互作用し、U2 SNRNA結合を促進します。

CUGBP2（ETR-3/NAPOR/BRUNOL3）は、下流のイントロンの位置21と74の間の結合を介して、心臓トロポニンT（CTNT）エクソン5の包含を促進します。CUGBP2がCTNTエクソン5包含を活性化する分子メカニズムは不明です。我々の結果は、CUGBP2が活性化されたU2 SNRNPの成分と直接相互作用し、exonの上流にある分岐部位へのU2 SNRNPの結合を強化する新しいメカニズムによってエクソン包含を促進することを示唆しています。in vitroスプライシングアッセイを使用して、組換えCUGBP2がCTNT pre-mRNAの形成を複雑にすることを示します。強化された複合体Aアセンブリには、下流のCUGBP2結合部位の二重要件とU2 SNRNP結合の上流の分岐部位と一致する上流と下流の両方のイントロンが必要です。また、CUGBP2は、U2 SnRNAのCTNT Pre-MRNAへの結合が、強化された複合Aアセンブリと一致するように促進することを示しています。タンデム親和性精製を使用したCUGBP2相互作用タンパク質の精製は、Core 17S U2 SNRNP成分SF3B145およびSF3B49がCUGBP2に直接結合することを実証します。CUGBP2は、17S SNRNP複合体のコンポーネントと直接的な相互作用を形成し、U2 SNRNPの結合を動員および/または安定化することにより、エクソン包含を活性化すると結論付けています。

CUGBP2 (ETR-3/NAPOR/BRUNOL3) promotes inclusion of cardiac troponin T (cTNT) exon 5 via binding between positions 21 and 74 of the downstream intron. The molecular mechanism by which CUGBP2 activates cTNT exon 5 inclusion is unknown. Our results suggest that CUGBP2 promotes exon inclusion by a novel mechanism in which CUGBP2 directly interacts with components of the activated U2 snRNP and enhances binding of U2 snRNP to the branch site located upstream of the exon. Using an in vitro splicing assay, we show that recombinant CUGBP2 enhances complex A formation of a cTNT pre-mRNA. Enhanced complex A assembly requires both the upstream and downstream introns consistent with dual requirements for the downstream CUGBP2-binding site and an upstream branch site for U2 snRNP binding. We also show that CUGBP2 enhances binding of U2 snRNA to the cTNT pre-mRNA consistent with enhanced complex A assembly. Purification of CUGBP2-interacting proteins using tandem affinity purification leads to the demonstration that the core 17S U2 snRNP components, SF3b145 and SF3b49 bind directly to CUGBP2. We conclude that CUGBP2 activates exon inclusion by forming direct interactions with components of the 17S snRNP complex and recruits and/or stabilizes binding of U2 snRNP.