長髪RNA（LHRNA）を発現するDNA構築物は、ペネウスモノドンをホワイトスポット症候群ウイルスから保護します

RNA干渉を介したペネウスモノドンでのホワイトスポット症候群ウイルス（WSSV）のサイレンシング遺伝子のための安定した費用対効果の高いDNAワクチンの使用がテストされています。2つのWSSV包囲遺伝子VP19およびVP28（PCMV-VP19-LHおよびPCMV-VP28-LH）に対して、in vivoで長髪RNA（LHRNA）をin vivoで構成的に発現するDNA構築物を使用して、病原体に対する保護を付与しました。GFP遺伝子（PCMV-GFP-LH）に向けられたLHRNAを発現する構造を使用して、非固有の保護を推定し、筋肉内投与でプラスミドがエビの体全体に広がり、少なくとも30日間持続することを示しました。10マイクログLHRNA発現構築物を注入したエビは、24H後に精製されたWSSVで挑戦され、PCMV-VP28-LHは、より高い生存、ウイルス量の減少、標的ウイルス遺伝子のサイレンシングによって証明された最良の保護を提供しました。投与量の増加（35マイクログ）では、この構成要素は、75％の生存率とターゲットVP28 mRNAの81％のサイレンシングでより良い保護を示しました。このコンストラクトは、実際には、最初の10（3）から10（5）コピーから10〜100コピーにウイルスコピー数を減らすことができます。非特異的なPCMV-GFP-LHは、ウイルス遺伝子の生存率とサイレンシングの改善も示しましたが、その効果はPCMV-VP28-LHの3分の1未満でした。サイレンシングコンストラクトは、高価値のひなを保護し、ウイルスの垂直感染を確認するための市販のエビhatch化場における優れた予防的アプローチになります。in vivoで発現したlhRNAによるサイレンシングは、エビの機能的なマイクロRNA経路の存在を確認します。

The use of stable and cost-effective DNA vaccines for silencing genes of White Spot Syndrome Virus (WSSV) in Penaeus monodon through RNA interference has been tested. DNA constructs that express long-hairpin RNA (lhRNA) constitutively in vivo against two WSSV envelop genes vp19 and vp28 (pCMV-VP19-LH and pCMV-VP28-LH) were used to confer protection against the pathogen. A construct expressing lhRNA directed against gfp gene (pCMV-GFP-LH) was used to estimate the non-specific protection and to show that on intramuscular administration the plasmid spreads all across the shrimp body and persists for at least 30 days. Shrimp injected with 10 microg lhRNA expressing constructs were challenged with purified WSSV after 24h and pCMV-VP28-LH provided best protection as evidenced by higher survival, lower viral load and silencing of the target viral gene. At an increased dose (35 microg), this construct showed better protection with 75% survival and 81% silencing of the target vp28 mRNA. The construct could actually reduce the viral copy number from the initial 10(3) to 10(5) copies to 10-100 copies. The non-specific pCMV-GFP-LH also showed improved survival and silencing of viral genes, although its effect was less than one third of pCMV-VP28-LH. Silencing constructs can be a good prophylactic approach in commercial shrimp hatcheries to protect high value brooders and to check the vertical transmission of virus, which is a major route of viral entry. Silencing by lhRNA expressed in vivo, confirms the presence of a functional microRNA pathway in shrimp.