培養細胞のコレステロール前駆体と植物ステロールのガスクロマトグラフィー/質量分析

強力なガスクロマトグラフィー/質量分析法を開発し、11の構造的に類似したコレステロール前駆体および植物ステロール（スクアレン、デスモステロール、7-デヒドロコレステロール、ラソステロール、ジモステロール、ジヒドロラノステロール、ラノステロール、FF-MAS、T-MAS、Campesterol、シトステロール）単一のクロマトグラフィー走行における培養ヒト肝細胞から。コレステロール、シトステロール、ラトステロールという重水素標識標識標識が内部基準として使用されました。アッセイで最も適切な識別を与えた検出のためにイオンを選択することに注意が払われました。複製分析により、変動係数が6％未満になりました。回収実験は、7-デヒドロコレステロール、カンペステロール、デスモステロール、ラトステロール、ジモステロール、コレステロールで満足のいくものであり、予想されるレベルと発見レベルの差は7％未満でした。他のステロールの場合、予想されるレベルと発見レベルの差は10〜16％の間で変化しました。この方法は、培養細胞におけるコレステロール合成のさまざまな阻害剤と刺激剤の効果に関する研究に適していると結論付けられています。さらに、この方法は、患者の異常に増加した後期コレステロール中間体が、クアレン後のコレステロール後生合成の異なる酵素欠陥に関連する遺伝障害の表現であるため、臨床応用にも関連しています。

We developed a powerful gas chromatographic/mass spectrometric method allowing quantitative analysis of 11 structurally similar cholesterol precursors and plant sterols (squalene, desmosterol, 7-dehydrocholesterol, lathosterol, zymosterol, dihydro-lanosterol, lanosterol, FF-MAS, T-MAS, campesterol, sitosterol) from cultured human hepatocytes in a single chromatographic run. Deuterium labelled cholesterol, sitosterol and lathosterol were used as internal standards. Care was taken to select ions for the detection that gave the most appropriate discrimination in the assay. Replicate analyses gave a coefficient of variation less than 6%. Recovery experiments were satisfactory for 7-dehydrocholesterol, campesterol, desmosterol, lathosterol, zymosterol and cholesterol with less than 7% difference between expected and found levels. For other sterols, the difference between expected and found levels varied between 10 and 16%. It is concluded that this method is suitable for studies on the effect of different inhibitors and stimulators of cholesterol synthesis in cultured cells. Additionally, the method is relevant also for clinical applications since abnormally increased late cholesterol intermediates in patients are representations of the inherited disorders linked to different enzyme defects in the post-squalene cholesterol biosynthesis.