高速光学断面蛍光寿命イメージングは​​、ライブセルシグナル伝達イベントの研究を許可します

高速ライブセルイメージングのために開発された時間領域光学的断面蛍光寿命イメージング（FLIM）顕微鏡を提示します。この単一の光子励起システムは、広いフィールド平行ピクセル検出と、スピニングニプコウディスク顕微鏡を使用した共焦点セクションを組み合わせています。1秒あたり最大10フレーム（FPS）で生細胞の蛍光寿命画像を取得することができ、細胞のダイナミクスとタンパク質の相互作用の高速フリムが、高スループット細胞イメージングおよびスクリーニングアプリケーションの可能性を備えたタンパク質相互作用を可能にします。シクロデキストリンを使用したコレステロール枯渇後の細胞膜の脂質秩序の変化のリアルタイムモニタリングと、FRETを使用した生細胞の生細胞におけるライブ細胞の小さなGTP ASE RAの活性化へのこのフリム顕微鏡の適用を実証します。

We present a time domain optically sectioned fluorescence lifetime imaging (FLIM) microscope developed for high-speed live cell imaging. This single photon excited system combines wide field parallel pixel detection with confocal sectioning utilizing spinning Nipkow disc microscopy. It can acquire fluorescence lifetime images of live cells at up to 10 frames per second (fps), permitting high-speed FLIM of cell dynamics and protein interactions with potential for high throughput cell imaging and screening applications. We demonstrate the application of this FLIM microscope to real-time monitoring of changes in lipid order in cell membranes following cholesterol depletion using cyclodextrin and to the activation of the small GTP-ase Ras in live cells using FRET.