ヘリカーゼ活性を研究するためのin vitroアッセイ

二本鎖DNAの巻き戻しは、組換え、修復、複製に関与するものなどの必須DNAプロセスのために一本鎖DNAテンプレートを作成するために必要です。DNAヘリカーゼと呼ばれる一連の特殊な酵素は、この目的に専念し、2つの相補的DNA鎖を一緒に安定に保持する水素結合やその他の非共有相互作用を破壊することにより、DNA鎖分離を触媒します。彼らは、補完的な塩基間の結合破損とDNAに沿ったヘリカーゼ酵素の転座の両方のためにヌクレオチド三リン酸の加水分解に由来するエネルギーを使用します。ヘリカーゼによって触媒されるDNA巻き戻し活性は、通常、酵素が結合して動くDNA鎖に関して、特定の方向性（5 'から3'または3 'から5'）を示します。DNAヘリカーゼの巻き戻し活性とその関連特性は、一般的なラボ機器を使用してin vitroで簡単に測定できます。さまざまなヘリカーゼ基質の調製に関する詳細な方法とメモと、調製した基質を使用したin vitroヘリカーゼアッセイについて説明します。

Unwinding of double-stranded DNA is required to create a single-stranded DNA template for essential DNA processes such as those involved in recombination, repair, and replication. A set of specialized enzymes called DNA helicases is dedicated to this purpose, catalyzing DNA strand separation by breaking hydrogen bonds and other noncovalent interactions that stably hold the two complementary DNA strands together. They use energy derived from the hydrolysis of nucleotide triphosphates for both bond breakage between complementary bases and translocation of a helicase enzyme along DNA. DNA unwinding activity catalyzed by a helicase usually exhibits a specific directionality (5' to 3' or 3' to 5') with respect to the DNA strand to which the enzyme is bound and moves. Unwinding activity ofa DNA helicase and its related properties can be easily measured in vitro using common lab equipment. We will describe the detailed methods and notes for preparation of various helicase substrates and in vitro helicase assays using the substrates prepared.