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親油性赤色染料であるオイルレッドOで標識された油滴の好中球貪食のための前述のアッセイは、マイクロタイタープレート形式に適合しています。オイルを積んだ好中球は、グルタルアルデヒドでプレートに固定され、摂理油で洗浄され、マイクロチタープレートリーダーの540 nmでの光吸収の直接測定により、オイルレッドOの摂取量を評価します。修正された手順の利点には、多様な条件下で、同時に、より大きな施設を使用して、食作用の速度(複数の決定)を決定する能力が含まれます。複数の遠心分離ステップが排除され、定量の前に各細胞ペレットからオイルレッドOの抽出の要件がオプションになります。このシステムは、リポ多糖類単独またはリポ多糖でウシ血清アルブミンとともに乳化した油滴について評価されています。リポ多糖だけで乳化した液滴の場合、効率的なオプソン化は、新鮮な血清単独で、おそらく補体依存性の経路を通じて新鮮な血清だけで達成されました。リポ多糖およびウシ血清アルブミンで乳化した液滴の場合、ウシ血清アルブミンに対する特定の抗血清は、非免疫新鮮血清よりもかなり効率的なオプソンでした。3番目のシステムは、テタヌストキソイドが以前にリポ多糖で乳化していた油滴に導入されたと説明されています。トキソイド抗原を含めると、テタヌス免疫グロブリンによるオプソン化の影響を受けやすく、アッセイシステムは、ヒトの免疫グロブリン機能の評価に適用される可能性があります。
親油性赤色染料であるオイルレッドOで標識された油滴の好中球貪食のための前述のアッセイは、マイクロタイタープレート形式に適合しています。オイルを積んだ好中球は、グルタルアルデヒドでプレートに固定され、摂理油で洗浄され、マイクロチタープレートリーダーの540 nmでの光吸収の直接測定により、オイルレッドOの摂取量を評価します。修正された手順の利点には、多様な条件下で、同時に、より大きな施設を使用して、食作用の速度(複数の決定)を決定する能力が含まれます。複数の遠心分離ステップが排除され、定量の前に各細胞ペレットからオイルレッドOの抽出の要件がオプションになります。このシステムは、リポ多糖類単独またはリポ多糖でウシ血清アルブミンとともに乳化した油滴について評価されています。リポ多糖だけで乳化した液滴の場合、効率的なオプソン化は、新鮮な血清単独で、おそらく補体依存性の経路を通じて新鮮な血清だけで達成されました。リポ多糖およびウシ血清アルブミンで乳化した液滴の場合、ウシ血清アルブミンに対する特定の抗血清は、非免疫新鮮血清よりもかなり効率的なオプソンでした。3番目のシステムは、テタヌストキソイドが以前にリポ多糖で乳化していた油滴に導入されたと説明されています。トキソイド抗原を含めると、テタヌス免疫グロブリンによるオプソン化の影響を受けやすく、アッセイシステムは、ヒトの免疫グロブリン機能の評価に適用される可能性があります。
A previously described assay for neutrophil phagocytosis of oil droplets labeled with the lipophilic red dye, oil red O, has been adapted to a microtiter plate format. Oil laden neutrophils are fixed to the plate with glutaraldehyde, washed free of uningested oil, and evaluated for degree of oil red O uptake by direct determination of light absorption at 540 nm in a microtiter plate reader. Advantages of the modified procedure include the ability to determine rates of phagocytosis (multiple determinations) under diverse conditions, simultaneously and with greater facility. Multiple centrifugation steps are eliminated and the requirement for extraction of oil red O from each cell pellet prior to quantitation becomes optional. The system has been evaluated for oil droplets emulsified with lipopolysaccharide alone or with lipopolysaccharide together with bovine serum albumin. For droplets emulsified with lipopolysaccharide alone, efficient opsonization was accomplished with fresh serum alone, through heat labile, presumably complement-dependent, pathways. For droplets emulsified with lipopolysaccharide and bovine serum albumin, specific antiserum to bovine serum albumin was a considerably more efficient opsonin than non-immune fresh serum. A third system is described in which tetanus toxoid was introduced into oil droplets that had been previously emulsified with lipopolysaccharide. Inclusion of toxoid antigens rendered the oil droplets susceptible to opsonization with tetanus immune globulin, making the assay system possibly applicable to evaluation of immunoglobulin function in humans.
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