マウスの鍵穴リンペットヘモシアニン（KLH）延期型過敏症（DTH）モデルの特性評価：P38キナーゼの役割

皮膚遅延型過敏症（DTH）応答の分子および細胞評価は、免疫調節剤の作用メカニズム（MOA）を評価するための有用なアプローチです。本報告書では、キーホールリンペットヘモシアニン（KLH）によって誘導される遅延型過敏症反応を特徴づけ、免疫調節物質BIRB-796を評価することでその有用性を検証しました。皮下抗原感作に続いて耳耳介の皮内KLHチャレンジは、24-48時間でピークに達した顕著な皮膚炎症をもたらしました。分子レベルでは、3つのマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（MAPK：P38、JNKおよびERK）の活性化、ケモカインCCL2/JE、CXCL2/MIP-2、CXCL1/KC、CCL3/MIP-1ALPHAの誘導がありました。CCL4/MIP-1BETAおよびCXCL10/IP-10、および耳の実質におけるサイトカインIL-1BETAおよびIL-10の発現。TNFALPHAタンパク質レベルの変調は、患者耳全体の臓器培養（EWOC）でのみ検出されました。この炎症性プロファイルと一致して、耳の実質への好中球と単核細胞の浸潤がありました。BIRB-796、強力なアロステリックP38 MAPK阻害剤は、耳の腫れ反応を減衰させ、炎症性プロファイルの減少と相関していました。BIRB-796は、JNKまたはERKキナーゼの活性化ではなくp38を阻害しましたが、好中球とマクロファージの浸潤の減少と相関する複数のケモカインが減少しました。CD4 T細胞は謙虚に減少しました。同様に、IL-1BETA、IL-10、TNFALPHAを含むサイトカインのレベルが低下しました。これらのデータは、皮膚の炎症に対する免疫調節因子を評価するためのこのモデルの有用性をサポートし、p38キナーゼの調節が炎症性皮膚状態の治療のために治療的価値があることを示唆しています。

Molecular and cellular assessment of dermal delayed-type hypersensitivity (DTH) responses is a useful approach for evaluating the mechanism of action (MOA) of immunomodulatory agents. In the present report, we characterized the delayed-type hypersensitivity response induced by keyhole limpet hemocyanin (KLH), and validated its utility by evaluating an immunomodulator, BIRB-796. Intradermal KLH challenge of the ear pinna following subcutaneous antigen sensitization resulted in a pronounced skin inflammation that peaked at 24-48h. At the molecular level, there was an activation of 3 mitogen-activated protein kinases (MAPKs: p38, JNK and ERK), an induction of the chemokines CCL2/JE, CXCL2/Mip-2, CXCL1/KC, CCL3/Mip-1alpha CCL4/Mip-1beta and CXCL10/IP-10, and expression of the cytokines IL-1beta and IL-10 in the ear parenchyma. Modulation of TNFalpha protein level was only detected in ex-vivo ear whole organ cultures (EWOC). Consistent with this inflammatory profile there was an infiltration of neutrophils and mononuclear cells into the ear parenchyma. BIRB-796, a potent allosteric p38 MAPK inhibitor attenuated the ear swelling response, which correlated with a reduced inflammatory profile. BIRB-796 inhibited p38 but not JNK or ERK kinase activation, decreased multiple chemokines which correlated with a decrease in the infiltration of neutrophils and macrophages; CD4 T cells were modesty reduced. Similarly, there was a decrease of levels of cytokines including IL-1beta, IL-10 and TNFalpha. These data support the utility of this model for evaluating immunomodulators on skin inflammation and suggest that modulation of p38 kinase may be of therapeutic value for the treatment of inflammatory skin conditions.