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Water research2009Nov01Vol.43issue(19)

レクリエーション水域での糞便汚染を評価するためのツールとしての糞便バクテロイドSPPの迅速なQPCRベースのアッセイ

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文献タイプ:
  • Journal Article
概要
Abstract

糞便指標菌(FIB、Escherichia coli、およびEnterococcus sp。など)の濃度は、人間が非ヒューマン糞便汚染を区別できないため、レクリエーション水の糞便汚染の原因を決定するために限られた方法でのみ使用できます。いくつかのBacteroides spp。潜在的な代替指標として提案されています。糞便バクテロイドsppを定量化するための迅速な文化に依存しない方法を開発しました。16S RRNA遺伝子を標的とする定量的PCR(QPCR)を使用します。アッセイは、最も一般的なヒトバクテロイドsppを特異的に標的と定量化します。さまざまな生物からの広範な糞便サンプルの分析を含む、この方法の詳細が提示されています。QPCRアッセイの特異性と性能は、ヒト下水とカモメのグアノがさまざまな環境水サンプルに接種された実験室実験を介してテストされました。糞便バクテロイド属の濃度、総腸球菌sp。、腸球菌、腸球菌、腸球菌、および腸球菌casseliflavusを測定し、emolococcus sp。大腸菌は膜ろ過(MF)によって定量化されました。ガルグアノでスパイクされたサンプルには、総腸球菌sp。、大腸菌、E。faecalis、およびE. casseLiflavusが非常に濃縮されており、これらの指標が動物の糞で顕著であることを示しています。一方、糞便バクテロイドspp。濃度は下水を含むサンプルで高く、カモメのグアノでスパイクされたサンプルでは比較的低かった。感度と特異性の結果は、急速な糞便バクテロイドsppを示唆しています。QPCRアッセイは、ヒト固有の糞便汚染の存在と濃度を効果的に予測するための有用なツールである可能性があります。

糞便指標菌(FIB、Escherichia coli、およびEnterococcus sp。など)の濃度は、人間が非ヒューマン糞便汚染を区別できないため、レクリエーション水の糞便汚染の原因を決定するために限られた方法でのみ使用できます。いくつかのBacteroides spp。潜在的な代替指標として提案されています。糞便バクテロイドsppを定量化するための迅速な文化に依存しない方法を開発しました。16S RRNA遺伝子を標的とする定量的PCR(QPCR)を使用します。アッセイは、最も一般的なヒトバクテロイドsppを特異的に標的と定量化します。さまざまな生物からの広範な糞便サンプルの分析を含む、この方法の詳細が提示されています。QPCRアッセイの特異性と性能は、ヒト下水とカモメのグアノがさまざまな環境水サンプルに接種された実験室実験を介してテストされました。糞便バクテロイド属の濃度、総腸球菌sp。、腸球菌、腸球菌、腸球菌、および腸球菌casseliflavusを測定し、emolococcus sp。大腸菌は膜ろ過(MF)によって定量化されました。ガルグアノでスパイクされたサンプルには、総腸球菌sp。、大腸菌、E。faecalis、およびE. casseLiflavusが非常に濃縮されており、これらの指標が動物の糞で顕著であることを示しています。一方、糞便バクテロイドspp。濃度は下水を含むサンプルで高く、カモメのグアノでスパイクされたサンプルでは比較的低かった。感度と特異性の結果は、急速な糞便バクテロイドsppを示唆しています。QPCRアッセイは、ヒト固有の糞便汚染の存在と濃度を効果的に予測するための有用なツールである可能性があります。

Concentrations of fecal indicator bacteria (FIB; e.g. Escherichia coli, and Enterococcus sp.) can only be used in limited ways for determining the source of fecal contamination in recreational waters because they cannot distinguish human from non-human fecal contamination. Several Bacteroides spp. have been suggested as potential alternative indicators. We have developed a rapid, culture-independent method for quantifying fecal Bacteroides spp. using quantitative PCR (QPCR) targeting the 16S rRNA gene. The assay specifically targets and quantifies the most common human Bacteroides spp. The details of the method are presented, including analyses of a wide range of fecal samples from different organisms. Specificity and performance of the QPCR assay were also tested via a laboratory experiment where human sewage and gull guano were inoculated into a range of environmental water samples. Concentrations of fecal Bacteroides spp., total Enterococcus sp., Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, and Enterococcus casseliflavus were measured using QPCR, and total Enterococcus sp. and E. coli were quantified by membrane filtration (MF). Samples spiked with gull guano were highly concentrated with total Enterococcus sp., E. coli, E. faecalis, and E. casseliflavus, demonstrating that these indicators are prominent in animal feces. On the other hand, fecal Bacteroides spp. concentrations were high in samples containing sewage and were relatively low in samples spiked with gull guano. Sensitivity and specificity results suggest that the rapid fecal Bacteroides spp. QPCR assay may be a useful tool to effectively predict the presence and concentration of human-specific fecal pollution.

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