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細胞生物学の重要な課題は、タンパク質の局在を直接機能させることです。緑色蛍光タンパク質（GFP）結合タンパク質、GBPは、GFPおよび黄色の蛍光タンパク質（YFP）などのいくつかのGFPバリエーションと同様に高い親和性と結合するラマ重鎖抗体に由来する13 kDa可溶性タンパク質です。クロモボディと呼ばれる分子である赤蛍光タンパク質（RFP）へのGBP融合は、以前にさまざまな動物抗原の局在をin vivoで追跡するために使用されました。この研究では、Chromobodyテクノロジーの使用を拡張して細胞を植え付け、GFPタグ付き植物タンパク質のin vivo研究のためのいくつかの用途を開発します。モデル植物のニコチアナ・ベンチャミアナで機能的なGBP：RFP融合（Chromobody）を発現するために、Agrobacterium Tumefaciensを介した過渡発現アッセイ（agroinfiltration）およびウイルス発現ベクター（agroenfection）を利用しました。Chromobodyは、PlantaのGFPおよびYFPタグ付きタンパク質を結合するのに効果的であることを示しました。最も興味深いことに、GBP：RFPは、GFP融合タンパク質の機能を妨害し、標的タンパク質によって媒介される表現型を変化させるために植物細胞質に対するGFP融合を誤解させる（トラップ）することができます。したがって、Chromobodyテクノロジーは、植物タンパク質のin vivo機能に直接リンクすることができるタンパク質干渉の新しい代替技術を表しています。
細胞生物学の重要な課題は、タンパク質の局在を直接機能させることです。緑色蛍光タンパク質（GFP）結合タンパク質、GBPは、GFPおよび黄色の蛍光タンパク質（YFP）などのいくつかのGFPバリエーションと同様に高い親和性と結合するラマ重鎖抗体に由来する13 kDa可溶性タンパク質です。クロモボディと呼ばれる分子である赤蛍光タンパク質（RFP）へのGBP融合は、以前にさまざまな動物抗原の局在をin vivoで追跡するために使用されました。この研究では、Chromobodyテクノロジーの使用を拡張して細胞を植え付け、GFPタグ付き植物タンパク質のin vivo研究のためのいくつかの用途を開発します。モデル植物のニコチアナ・ベンチャミアナで機能的なGBP：RFP融合（Chromobody）を発現するために、Agrobacterium Tumefaciensを介した過渡発現アッセイ（agroinfiltration）およびウイルス発現ベクター（agroenfection）を利用しました。Chromobodyは、PlantaのGFPおよびYFPタグ付きタンパク質を結合するのに効果的であることを示しました。最も興味深いことに、GBP：RFPは、GFP融合タンパク質の機能を妨害し、標的タンパク質によって媒介される表現型を変化させるために植物細胞質に対するGFP融合を誤解させる（トラップ）することができます。したがって、Chromobodyテクノロジーは、植物タンパク質のin vivo機能に直接リンクすることができるタンパク質干渉の新しい代替技術を表しています。
A key challenge in cell biology is to directly link protein localization to function. The green fluorescent protein (GFP)-binding protein, GBP, is a 13-kDa soluble protein derived from a llama heavy chain antibody that binds with high affinity to GFP as well as to some GFP variants such as yellow fluorescent protein (YFP). A GBP fusion to the red fluorescent protein (RFP), a molecule termed a chromobody, was previously used to trace in vivo the localization of various animal antigens. In this study, we extend the use of chromobody technology to plant cells and develop several applications for the in vivo study of GFP-tagged plant proteins. We took advantage of Agrobacterium tumefaciens-mediated transient expression assays (agroinfiltration) and virus expression vectors (agroinfection) to express functional GBP:RFP fusion (chromobody) in the model plant Nicotiana benthamiana. We showed that the chromobody is effective in binding GFP- and YFP-tagged proteins in planta. Most interestingly, GBP:RFP can be applied to interfere with the function of GFP fusion protein and to mislocalize (trap) GFP fusions to the plant cytoplasm in order to alter the phenotype mediated by the targeted proteins. Chromobody technology, therefore, represents a new alternative technique for protein interference that can directly link localization of plant proteins to in vivo function.
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