アミロイドフィブリル検出のためのチオフラビンT蛍光アッセイは、外因性化合物の存在によってバイアスされる可能性があります

チオフラビンT（THT）色素蛍光は、ポリフェノールなどの抗アミロイド形成化合物の存在下でのアミロイドフィブリルの形成と阻害を定量化するために定期的に使用されます。しかし、この研究では、3つのポリフェノール（クルクミン、ケルセチン、レスベラトロール）を使用して、このような外因性化合物の存在下では蛍光を使用する必要があることが示されました。ケルセチンとクルクミンの強い吸収性および蛍光特性は、その場のリアルタイムTHTアッセイと単一のタイムポイント希釈THTタイプアッセイの両方で、THT蛍光測定値に有意にバイアスすることがわかりました。0.01および1ママの低い濃度でのクルクミンの存在は、フィブリラーアミロイドベータ（1-42）（0.5ママ）に関連するTHT蛍光を妨害するのに十分であり、それぞれフィブリラーの減少およびカルボキシメチル化カッパカセイン（50マム）。フィブリラーアミロイドベータ（1-42）に関連するTHT蛍光は、高濃度のレスベラトロールを使用して偏っています。レスベラトロールは、THT蛍光の波長で分光的に活性ではないポリフェノールであり、THTと外因性化合物の間に直接的な相互作用があることを意味します。フィブリルのTHTとの競争的拘束力。したがって、外因性化合物の存在下でTHTが使用されるすべての場合において、添加剤が分光的に活性であるかどうかに関係なく、アミロイド関連THT蛍光のバイアスをテストする必要があります。これらのテストを実施する簡単な方法について説明しました。Congo Red Spectral Shiftアッセイは、THTに代わるより実行可能な分光光度計算の代替として実証されていますが、透過型電子顕微鏡などの関連する方法も、色素ベースのアッセイとは無関係にフィブリル形成を評価するために使用する必要があります。構造化されたデジタル要約： * Mint-7259867：RCMKAPPA-CN（UNIPROTKB：P02668）およびRCMKAPPA-CN（UNIPROTKB：P02668）バインド（MI：0407）による電子顕微鏡（MI：0040）：P02668）およびrcmkappa-cn（uniprotkb：p02668）蛍光技術（MI：0051） * MINT-7259878によるバインド（MI：0407）：アミロイドベータ（Uniprotkb：P05067）およびAmyliod Beta（Unilid Beta（Uniprotkb：P05067）0407）蛍光技術による（MI：0051）。

Thioflavin T (ThT) dye fluorescence is used regularly to quantify the formation and inhibition of amyloid fibrils in the presence of anti-amyloidogenic compounds such as polyphenols. However, in this study, it was shown, using three polyphenolics (curcumin, quercetin and resveratrol), that ThT fluorescence should be used with caution in the presence of such exogenous compounds. The strong absorptive and fluorescent properties of quercetin and curcumin were found to significantly bias the ThT fluorescence readings in both in situ real-time ThT assays and single time-point dilution ThT-type assays. The presence of curcumin at concentrations as low as 0.01 and 1 mum was sufficient to interfere with the ThT fluorescence associated with fibrillar amyloid-beta(1-42) (0.5 mum) and fibrillar reduced and carboxymethylated kappa-casein (50 mum), respectively. The ThT fluorescence associated with fibrillar amyloid-beta(1-42) was also biased using higher concentrations of resveratrol, a polyphenol that is not spectroscopically active at the wavelengths of ThT fluorescence, implying that there can be direct interactions between ThT and the exogenous compound and/or competitive binding with ThT for the fibrils. Thus, in all cases where ThT is used in the presence of an exogenous compound, biases for amyloid-associated ThT fluorescence should be tested, regardless of whether the additive is spectroscopically active. Simple methods to conduct these tests were described. The Congo red spectral shift assay is demonstrated as a more viable spectrophotometric alternative to ThT, but allied methods, such as transmission electron microscopy, should also be used to assess fibril formation independently of dye-based assays. Structured digital abstract: * MINT-7259867: RCMkappa-CN (uniprotkb:P02668) and RCMkappa-CN (uniprotkb:P02668) bind (MI:0407) by electron microscopy (MI:0040) * MINT-7258930: RCMkappa-CN (uniprotkb:P02668) and RCMkappa-CN (uniprotkb:P02668) bind (MI:0407) by fluorescence technologies (MI:0051) * MINT-7259878: Amyloid beta (uniprotkb:P05067) and Amyloid beta (uniprotkb:P05067) bind (MI:0407) by fluorescence technologies (MI:0051).