緑茶ポリフェノール（ - ） - HIT-T15膵臓ベータ細​​胞株に対するエピガロカテキン-3-ガレートの前酸化効果

エピガロカテキン-3-ガレート（EGCG）は、緑茶の主要なポリフェノール成分であり、抗酸化物質として機能すると考えられています。しかし、増加する証拠は、EGCGが反応性酸素種（ROS）とその後の細胞死を生成することを示しています。この研究では、HIT-T15膵ベータ細胞株に対するEGCGの促進効果を調査しました。用量依存性細胞生存率は、細胞カウントキット8アッセイで監視され、アポトーシスの誘導は細胞死ELISAキットと彗星アッセイによって分析されました。細胞外H（2）O（2）は、Amplex Red過酸化水素アッセイキットを使用して決定されました。細胞内酸化ストレスは、プローブとしてDCFHジアセテート（DA）を使用した2 '、7'-ジクロロフルオレシン（DCFH）酸化の蛍光分析によって測定されました。EGCG（5-100 microM）による治療は、膵臓ベータ細​​胞の生存率を低下させ、アポトーシス細胞死の付随的な増加を引き起こし、H（2）O（2）およびROSの産生を増加させました。カタラーゼ、鉄キーリング剤ジエチレントリアアミン酢酸酸、およびFe（II）特異的キレート因子O-フェナントロリンはすべてEGCGの効果を抑制し、メカニズムにおけるH（2）O（2）とFe（II）の両方の関与を示しています。EGCGのアクションの。抗酸化剤N-アセチル - シュタインおよびα-リポ酸もEGCGの効果を抑制しました。さらに、EGCGは外因性H（2）O（2）を除去しませんでしたが、むしろ、膵臓ベータ細​​胞におけるH（2）O（2）誘導酸化細胞損傷を相乗的に増加させました。一緒に、これらの発見は、HIT-T15膵臓ベータ細​​胞株で、EGCGがH（2）O（2）の生成を媒介し、酸化細胞損傷を誘発する高毒性ラジカルのFe（II）依存性形成を引き起こしたことを示唆しています。。

Epigallocatechin-3-gallate (EGCG) is the main polyphenolic constituent in green tea and is believed to function as an antioxidant. However, increasing evidence indicates that EGCG produces reactive oxygen species (ROS) and subsequent cell death. In this study, we investigated the prooxidative effects of EGCG on the HIT-T15 pancreatic beta cell line. Dose-dependent cell viability was monitored with the cell counting kit-8 assay, while the induction of apoptosis was analyzed by a cell death ELISA kit and comet assay. Extracellular H(2)O(2) was determined using the Amplex Red Hydrogen Peroxide Assay Kit. Intracellular oxidative stress was measured by fluorometric analysis of 2',7'-dichlorofluorescin (DCFH) oxidation using DCFH diacetate (DA) as the probe. Treatment with EGCG (5-100 microM) decreased the viability of pancreatic beta cells, caused concomitant increases in apoptotic cell death, and increased the production of H(2)O(2) and ROS. Catalase, the iron-chelating agent diethylenetriaminepentaacetic acid, and the Fe(II)-specific chelator o-phenanthroline all suppressed the effects of EGCG, indicating the involvement of both H(2)O(2) and Fe(II) in the mechanism of action of EGCG. The antioxidant N-acetyl-cysteine and alpha-lipoic acid also suppressed the effects of EGCG. Furthermore, EGCG did not scavenge exogenous H(2)O(2), but rather, it synergistically increased H(2)O(2)-induced oxidative cell damage in pancreatic beta cells. Together, these findings suggest that in the HIT-T15 pancreatic beta cell line, EGCG mediated the generation of H(2)O(2), triggering Fe(II)-dependent formation of a highly toxic radical that in turn induced oxidative cell damage.