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Reproduction in domestic animals = Zuchthygiene2010Oct01Vol.45issue(5)

血清飢ationによるヤギ線維芽細胞の細胞周期の同期は、アポトーシスを引き起こします

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

細胞周期の段階とドナー細胞の同期は、体細胞核移植の成功に影響を与える重要な要因です。この研究では、血清飢vが特定の細胞死に影響を与えるかどうかを調べました。また、ヤギ真皮線維芽細胞細胞の細胞周期特性とアポトーシスに対する血清飢v、培養、および完全な合流点(コンフルエント + 72時間)の効果を研究しました。細胞は、1.5歳の雌ヤギの耳から得られました。次の実験グループは、線維芽細胞細胞について分析されました:(i)通常成長している、(ii)コンフルエント、(iii)完全なコンフルエンシー、(iv)細胞を48時間飢え、(v)細胞を72時間飢えた。フローサイトメトリーによる細胞周期分布の分析により、通常のサイクリング細胞の4.56および51.88%がそれぞれG0およびG1相であることが示されました。コンフルエントグループでは、細胞の80%がG0/G1相で逮捕されました。48および72時間の血清飢ationは、G0/G1相でそれぞれ84.78%および90.1%の細胞を逮捕しましたが、対照群と比較した場合に有意差を示しました(P <0.05)。PIおよびFITCによる二重染色は、G0相とG1位相を区別します。完全なコンフルエンシーグループでは、91.53%の細胞がG0/G1期にありましたが、血清飢ved群とは対照的に、G0/G1細胞のこの高い割合は主にG1細胞と関連していました。通常の培養条件下では、細胞の6.39%が早期アポトーシスを受けました。コンフルエントグループでは、細胞の8.93%が早期アポトーシスを示しました。48時間と72時間の血清飢ationは、それぞれ細胞の8.91および39.83%で早期アポトーシスを引き起こしました。完全なコンフルエンシー治療では、アポトーシス細胞の数が大幅に増加しませんでした(8.67%)。72時間後、血清の飢vは早期アポトーシスを有意に増加させました(P <0.05)。結論として、完全なコンフルエンシーの使用は、G0/G1相で細胞を停止し、血清飢ationグループと比較してアポトーシスが少ないため、細胞周期の同期に適しています。

細胞周期の段階とドナー細胞の同期は、体細胞核移植の成功に影響を与える重要な要因です。この研究では、血清飢vが特定の細胞死に影響を与えるかどうかを調べました。また、ヤギ真皮線維芽細胞細胞の細胞周期特性とアポトーシスに対する血清飢v、培養、および完全な合流点(コンフルエント + 72時間)の効果を研究しました。細胞は、1.5歳の雌ヤギの耳から得られました。次の実験グループは、線維芽細胞細胞について分析されました:(i)通常成長している、(ii)コンフルエント、(iii)完全なコンフルエンシー、(iv)細胞を48時間飢え、(v)細胞を72時間飢えた。フローサイトメトリーによる細胞周期分布の分析により、通常のサイクリング細胞の4.56および51.88%がそれぞれG0およびG1相であることが示されました。コンフルエントグループでは、細胞の80%がG0/G1相で逮捕されました。48および72時間の血清飢ationは、G0/G1相でそれぞれ84.78%および90.1%の細胞を逮捕しましたが、対照群と比較した場合に有意差を示しました(P <0.05)。PIおよびFITCによる二重染色は、G0相とG1位相を区別します。完全なコンフルエンシーグループでは、91.53%の細胞がG0/G1期にありましたが、血清飢ved群とは対照的に、G0/G1細胞のこの高い割合は主にG1細胞と関連していました。通常の培養条件下では、細胞の6.39%が早期アポトーシスを受けました。コンフルエントグループでは、細胞の8.93%が早期アポトーシスを示しました。48時間と72時間の血清飢ationは、それぞれ細胞の8.91および39.83%で早期アポトーシスを引き起こしました。完全なコンフルエンシー治療では、アポトーシス細胞の数が大幅に増加しませんでした(8.67%)。72時間後、血清の飢vは早期アポトーシスを有意に増加させました(P <0.05)。結論として、完全なコンフルエンシーの使用は、G0/G1相で細胞を停止し、血清飢ationグループと比較してアポトーシスが少ないため、細胞周期の同期に適しています。

Cell cycle stage and synchronization of donor cells are important factors influencing the success of somatic cell nuclear transfer. This study examined whether serum starvation has any effect on specific cell death. We also studied the effects of serum starvation, culture to confluence, and full confluency (confluent + 72 h) on cell cycle characteristics and apoptosis of goat dermal fibroblast cells. The cells were obtained from the ear of a 1.5-year-old female goat. The following experimental groups were analysed for fibroblast cells: (i) normally growing, (ii) confluent, (iii) full confluency, (iv) cells starved for 48 h and (v) cells starved for 72 h. Analysis of cell cycle distribution by flow cytometry showed that 4.56 and 51.88% of normal cycling cells were at the G0 and G1 phases respectively. In the confluent group, 80% of the cells were arrested in the G0/G1 phase. Serum starvation for 48 and 72 h arrested 84.78% and 90.1% cells at the G0/G1 phase respectively which showed a significant difference when compared with the control group (p < 0.05). Double staining by PI and FITC distinguishes G0 phase from G1 phase. In the full confluency group, 91.53% of cells were at G0/G1 stage, but in contrast to the serum starved group, this high percentage of G0/G1 cells was mainly associated with G1 cells. Under normal culture conditions, 6.39% of cells underwent early apoptosis. In the confluent group 8.93% of cells showed early apoptosis. Serum starvation for 48 and 72 h caused early apoptosis in 8.91 and 39.83% of the cells respectively. Full confluency treatment did not increase the number of apoptotic cells significantly (8.67%). After 72 h, serum starvation significantly increased early apoptosis (p < 0.05). In conclusion, the use of full confluency is suitable for cell cycle synchronization because it arrests cells at the G0/G1 phase and also induces less apoptosis in comparison with the serum starvation group.

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