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Streptomyces Coelicolor A3（2）のメチル特異的制限システムは、非メチル化およびメチル化PSET152 DNAを使用して形質転換を実行することにより分析されました。Streptomyces coelicolorは、大腸菌のダム、DCM、およびHSD修飾システムによってin vivoでメチル化されたDNAを強く制限することがわかった。プラスミド上の部位が大幅に少ないにもかかわらず、HSD修飾DNAはダム修飾DNAと同じくらい強く制限されていました。DCM修飾プラスミドは、ダムまたはHSD修飾DNAよりも強く制限されていました。異なるメチラーゼによってin vitroで修飾されたプラスミドDNAの制限は、メチル化された部位の数よりもメチル化された配列に大きな依存性を示しました。Streptomyces Coelicolor変異体は、メチル特異的制限ヌクレアーゼ（SCO4213、SCO4631およびSCO2863遺伝子の産物、ならびにSCO3261-SCO3262オペロン）をコードする可能性のある候補として同定された遺伝子を欠いている遺伝子を欠いているため、後部のゲノミック島に位置するSCO3261-SCO3262オペロン）が構築されました。S. coelicolor染色体の;これらの変異体は、メチル化DNA制限の部分的な緩和を示しました。密接な相対ストレプトマイセスのこれらの遺伝子のクローニングは、この種によるメチル化DNAの制限を増加させ、S。coelicolorのメチル特異的制限システムの一部としての役割を確認しました。
Streptomyces Coelicolor A3（2）のメチル特異的制限システムは、非メチル化およびメチル化PSET152 DNAを使用して形質転換を実行することにより分析されました。Streptomyces coelicolorは、大腸菌のダム、DCM、およびHSD修飾システムによってin vivoでメチル化されたDNAを強く制限することがわかった。プラスミド上の部位が大幅に少ないにもかかわらず、HSD修飾DNAはダム修飾DNAと同じくらい強く制限されていました。DCM修飾プラスミドは、ダムまたはHSD修飾DNAよりも強く制限されていました。異なるメチラーゼによってin vitroで修飾されたプラスミドDNAの制限は、メチル化された部位の数よりもメチル化された配列に大きな依存性を示しました。Streptomyces Coelicolor変異体は、メチル特異的制限ヌクレアーゼ（SCO4213、SCO4631およびSCO2863遺伝子の産物、ならびにSCO3261-SCO3262オペロン）をコードする可能性のある候補として同定された遺伝子を欠いている遺伝子を欠いているため、後部のゲノミック島に位置するSCO3261-SCO3262オペロン）が構築されました。S. coelicolor染色体の;これらの変異体は、メチル化DNA制限の部分的な緩和を示しました。密接な相対ストレプトマイセスのこれらの遺伝子のクローニングは、この種によるメチル化DNAの制限を増加させ、S。coelicolorのメチル特異的制限システムの一部としての役割を確認しました。
The methyl-specific restriction system of Streptomyces coelicolor A3(2) was analyzed by carrying out transformations with unmethylated and methylated pSET152 DNA. Streptomyces coelicolor was found to strongly restrict DNA methylated in vivo by the Dam, Dcm and Hsd modification systems of Escherichia coli. Hsd-modified DNA was restricted as strongly as Dam-modified DNA, even though there are significantly fewer sites on the plasmid; Dcm-modified plasmid was restricted more strongly then either Dam- or Hsd-modified DNA. Restriction of plasmid DNA modified in vitro by different methylases also showed a greater dependence on the methylated sequence than on the number of methylated sites. Streptomyces coelicolor mutants were constructed that lacked genes identified as the likely candidates for encoding methyl-specific restriction nucleases (the products of the SCO4213, SCO4631 and SCO2863 genes, as well as the SCO3261-SCO3262 operon) that are located in the laterally acquired genomic islands of the S. coelicolor chromosome; these mutants showed partial alleviation of methylated DNA restriction. Cloning of these genes in the close relative Streptomyces lividans increased the restriction of methylated DNA by this species, confirming their role as part of the methyl-specific restriction system of S. coelicolor.
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