シロイヌナズナの複製タンパク質A 70Aは、DNA損傷応答とテロメア長の恒常性に必要です

複製タンパク質A1（RPA1/RPA70）は、RPA2/RPA32およびRPA3/RPA14サブユニットとともにヘテロトリメリック複合体を形成します。酵母および哺乳類のRPA70と比較して、植物の要因に関する情報は限られています。この研究では、ATRPA70Aの機能を分析しました。これは、シロイヌナズナの4つのパラログの間でヒトRPA70に最も類似しています。RNAブロット分析により、ATRPA70Aは分化した組織と分裂組織を含む植物器官で遍在的に発現し、その発現はDNA損傷ストレスに応答してアップレギュレートされました。酵母2ハイブリッドおよび共免疫沈降分析は、ATRPA70Aが2つのパラログの1つであるシロイヌナズナRPA32Aと優先的に相互作用することを示しました。T-DNA挿入によるATRPA70Aの不活性化は、通常の条件下での成長に影響を与えませんでしたが、メチルメタンスルホン酸、ブレオマイシン、ヒドロキシ尿症などの遺伝毒性薬に対する感受性が増加しました。端子制限フラグメント分析により、ATRPA70A欠損系統のテロメアの長さは野生型よりも有意に大きいことが明らかになりましたが、アンチセンスアタートを発現する変異体（テロメラーゼ触媒サブユニット遺伝子）が連続した世代の間に短縮されたことが明らかになりました。これらの結果は、ATRPA70Aが二本鎖DNA休憩の修復に関与しており、テロメラーゼ依存性テロメア長調節に寄与する可能性があることを示しています。

Replication protein A1 (RPA1/RPA70) forms a heterotrimeric complex together with RPA2/RPA32 and RPA3/RPA14 subunits which plays essential roles in various aspects of DNA metabolism including replication, repair, recombination and telomere maintenance. Compared with RPA70 in yeast and mammals, limited information is available about the factor in plants. In this study, we analyzed the functions of AtRPA70a, which is most similar to human RPA70 among four paralogs in Arabidopsis thaliana. RNA blot analysis showed that AtRPA70a is expressed ubiquitously in plant organs containing differentiated and meristematic tissues, while its expression was up-regulated in response to DNA damage stress. Yeast two-hybrid and co-immunoprecipitation analyses showed that AtRPA70a interacted preferentially with Arabidopsis RPA32a, one of two paralogs. Inactivation of AtRPA70a by T-DNA insertion did not affect growth under normal conditions, but resulted in increased sensitivity to genotoxic agents such as methylmethane sulfonate, bleomycin and hydroxyurea. Terminal restriction fragment analysis revealed that telomere lengths in an AtRPA70a-deficient line were significantly larger than in the wild type, whereas those in the mutant expressing antisense AtTERT (telomerase catalytic subunit gene) were shortened during successive generations. These results demonstrate that AtRPA70a is involved in repair of double-strand DNA breaks and possibly contributes to telomerase-dependent telomere length regulation.