ケト・エノールの互変異性とエピダリゼーション現象を考慮して、牛乳中のいくつかのテトラサイクリンの同時測定のための液体クロマトグラフィー - タンデム質量分析アッセイ

ウシ乳中のいくつかのテトラサイクリン残基の分析のための液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析（LC-ESI-MS/MS）法が開発されました。サンプルの牛乳脱タンパク化/抽出は、酸性化アセトニトリルで行われました。固相抽出（SPE）により希釈して精製した後、抽出物を複数の反応モニタリング（MRM）獲得モードで動作する機器に注入しました。C-11aとC-12の間のクロルテトラサイクリンのケトエノール互変性のオキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、クロルテトラサイクリンのC-4での可逆的なエピマー化は、信頼できる定量化のために考慮されました。劣化も考慮され、同じ目的で最小化されました。抽出およびクリーンアップステップの最適化には、望ましい関数を備えた中央複合（応答面）設計が採用されました。最適化により、100ミクログL（-1）での4エピオキシテトラサイクリンでは、より多くの極性分析物の抽出効率が93.9％、オキシテトラサイクリンで95.8％に達しました（-1）。検証は、委員会の決定2002/657/ECによって確立された基準に従って実行されました。

A liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometric (LC-ESI-MS/MS) method for the analysis of several tetracyclines residues in bovine milk has been developed. Milk deproteinization/extraction of samples was performed with acidified acetonitrile. After diluting and purification by solid-phase extraction (SPE), the extracts were injected into the instrument operated in Multiple Reaction Monitoring (MRM) acquisition mode. The reversible epimerization at C-4 of oxytetracycline, tetracycline and chlortetracycline and the keto-enol tautomerism of chlortetracycline between C-11a and C-12 were considered for reliable quantification. Degradation was also taken in account and minimized for the same purpose. A central composite (response surface) design with desirability function was employed for the optimization of extraction and clean-up steps. The optimization improved the extraction efficiency of the more polar analytes reaching 93.9% for 4-epioxytetracycline and 95.8% for oxytetracycline at 100 microg L(-1). The validation was performed following the criteria established by Commission Decision 2002/657/EC.