YACおよびBAC DNAコンストラクトを使用したトランスジェニックラットの生成

20 kB未満の単純なプラスミドベクターを持つトランスジェニックラットは、導入された導入遺伝子の発現と組織特異性が不十分であることを示しています。酵母人工染色体（YAC）および細菌の人工染色体（BAC）に由来するベクターは、それぞれ約1 MB（YAC）と約200 kB（BAC）のDNAフラグメントで構成され、さまざまな内因性調節配列を含むことが期待されていました。よく、トランスジェニック動物の内因性の対応物に匹敵する発現プロファイルを示しました。YACおよびBACベクトルを使用してトランスジェニックラットを作ろうとしている間、私たちは2つの問題に直面しました。十分に濃縮された無傷のDNAを準備する方法と、ラットの脆弱な核卵子に大きなDNAフラグメントを確実にマイクロインジェクする方法です。これらの問題を解決した後、YAC/BAC遺伝子コンストラクト（YAC/BAC）を核前OVAに導入することにより、トランスジェニックラットを作ることができました。そして、トランスジェニックラットのこれらの遺伝子の相対転写率を調べました。この章では、この注入プロセスに焦点を当てます。

Transgenic rats with a simple plasmid vector smaller than 20 Kb show insufficient expression and tissue specificity of the introduced transgene. Vectors derived from yeast artificial chromosome (YAC) and bacterial artificial chromosome (BAC), consisting of DNA fragments up to approximately 1 Mb (YAC) and approximately 200 Kb (BAC), respectively, and containing various endogenous regulatory sequences, were expected to work well and showed expression profiles comparable to their endogenous counterparts in transgenic animals. While attempting to make transgenic rats using YAC and BAC vectors, we faced two problems: how to prepare sufficiently concentrated intact DNA and how to reliably microinject a large DNA fragment into the fragile pronuclear ova of the rat. After solving these problems, we were able to make transgenic rats by introducing YAC/BAC gene constructs (YACs/BACs) into the pronuclear ova. And then we examined the relative transcription rates of these genes in the transgenic rats. In this chapter, we focus on this injection process.