HJURPは、高度に保存されたN末端ドメインを介してCENP-Aに結合し、セントロメアでの堆積を媒介します

ヒトヒストンH3バリアントであるCENP-Aは、Centromericクロマチンの従来のヒストンH3を置き換え、Centromere特異的DNA結合因子とともに、キネトコアのアセンブリを指示します。プレエンセロソームE-CENP-A複合体を精製しました。複合体のメンバーであるHJURPが、CENP-AのCENP-Aのセントロメアへの細胞周期特異的ターゲティングに必要であることがわかりました。HJURPは、in vitroで裸のDNAへのCENP-A/H4四量体の効率的な堆積を促進しました。細菌発現HJURPは、化学量論比でCENP-A/H4テトラマーと結合しますが、H3/H4テトラマーには結合しません。この結合は、CBDと呼ばれる保存されたHJURPショートN末端ドメインを介して発生しました。CBDのTLTYボックスと名付けられた脊椎動物で特定された新規特性は、HJURP-CENP-A/H4複合体の形成に不可欠でした。私たちのデータは、HJURPを脊椎動物CENP-Aシャペロンとして特定し、CENP-Aとの相互作用のモードを分析しました。

The human histone H3 variant, CENP-A, replaces the conventional histone H3 in centromeric chromatin and, together with centromere-specific DNA-binding factors, directs the assembly of the kinetochore. We purified the prenucelosomal e-CENP-A complex. We found that HJURP, a member of the complex, was required for cell cycle specific targeting of CENP-A to centromeres. HJURP facilitated efficient deposition of CENP-A/H4 tetramers to naked DNA in vitro. Bacterially expressed HJURP binds at a stoichiometric ratio to the CENP-A/H4 tetramer but not to the H3/H4 tetramer. The binding occurred through a conserved HJURP short N-terminal domain, termed CBD. The novel characteristic identified in vertebrates that we named TLTY box of CBD, was essential for formation of the HJURP-CENP-A/H4 complex. Our data identified HJURP as a vertebrate CENP-A chaperone and dissected its mode of interactions with CENP-A.