DNA免疫後の抗体の検出のために細胞内ビオチン化抗原を使用した新規ELISA

対応する抗原タンパク質をコードするDNAの注射を指すDNA予防接種またはワクチン接種は、抗原としてタンパク質を必要としないため、動物の抗体（ABS）の産生（ABS）を誘導するための魅力的な方法となっています。しかし、抗原に応じて生成されたABSを検出する方法は、免疫動物の血清のABSの定量化と、モノクローナル抗体（mAb）生産ハイブリドーマのスクリーニングに依然として不可欠です。ここでは、抗原タンパク質の細胞内ビオチン化を採用することにより、精製が困難な抗原に対するABSの評価のための新しいシステムを報告します。ペプチドでタグ付けされた抗原は、ビオチン化（バイオタグ）およびコドンに最適化された細菌ビラビオチンリガーゼを哺乳類細胞で共発現し、ビオチン化バイオタグ付き抗原をストレプトアビジン誘発板で捕獲しました。全長の組換えタンパク質がDNA免疫マウスの血清で検出されたために精製するのが困難な5つのヒト核抗原に対するABS、およびこれらの3つの抗原に対するIgG mAbsはELISAによって選択されました。結果は、抗原の細胞内ビオチン化を採用しているこのシステムが、DNA予防接種後のABSの産生を刺激するための強力な手法であることを示しています。

DNA immunization or vaccination, which refers to the injection of DNA encoding the corresponding antigen proteins, has become an attractive method for inducing the production of antibodies (Abs) in animals, since it does not require proteins as antigens. However, a method for detecting Abs produced in response to antigens is still essential for the quantification of Abs in the sera of immunized animals and for the screening of monoclonal antibody (mAb)-producing hybridomas. Here, we report a new system for the evaluation of Abs against antigens that are difficult to purify, by employing intracellular biotinylation of the antigen protein. The antigen tagged with a peptide to be biotinylated (Bio-tag) and codon-optimized bacterial BirA biotin ligase were co-expressed in mammalian cells, and the biotinylated Bio-tagged antigen was captured on a streptavidin-coated plate. Abs against five human nuclear antigens that were difficult to purify as full-length recombinant proteins were detected in the sera of DNA-immunized mice, and IgG mAbs against three of these antigens were selected by ELISA. The results demonstrate that this system employing intracellular biotinylation of the antigen is a powerful technique for stimulating the production of Abs following DNA immunization.