[子供から隔離されたピロリのヘリコバクターピロリのクローニングとシーケンス分析]

目的：子供からPGEX-4T-1発現プラスミドに分離されたHelicobacter pylori（H. pylori）のureb遺伝子をクローンし、配列分析を行います。 方法：特定のプライマーのペアは、GenBankのH. Pylori Ureb遺伝子に従って設計されました。子供から分離されたH. pylori株をテンプレートとして使用して、PCRによってureb遺伝子が得られました。ECOR Iではなく、消化した後、PCR産生は同じ酵素で消化されたPGEX-4T-1とリンクしていました。組換えプラスミドはE.COLI BL21に形質転換され、二重酵素消化と配列分析によって同定されました。シーケンスの結果を、GenBankの遺伝子配列と比較しました。 結果：UREB遺伝子は、子供のH. pylori株GZCH1から成功裏に増幅されました。サイズは1710 BPでした。目的バンドは、二重酵素消化によって識別されました。DNAシーケンスは、UREBが正しいオープンリーディングフレームにあることを示しました。配列比較分析では、他の株を持つUREB遺伝子のDNAおよびアミノ酸配列同一性が98％であることが示されました。H. pylori株GZCH1のウレブのシーケンスは、GenBankに提出されました（アクセッション番号：FJ455126）。 結論：Pylori株GZCH1のUREBは、PGEX-4T-1に正常にクローニングされており、これは口腔H.ピロリワクチンの研究の基礎を提供します。

OBJECTIVE: To clone UreB gene of Helicobacter pylori (H. pylori) isolated from children to pGEX-4T-1 expression plasmid, and do sequence analysis. METHODS: A pair of specific primer was designed according to H. pylori UreB gene in the GenBank. Using H. pylori strains isolated from children as a template, a UreB gene was obtained by PCR. After EcoR I and Not I digestion, the PCR production was linked with pGEX-4T-1 which was digested with the same enzymes. The recombinant plasmid was transformed into E.coli BL21 and identified by double enzyme digestion and sequence analysis. The sequence results were compared with the gene sequence in the GenBank. RESULTS: A UreB gene was successfully amplified from children's H. pylori strain GZCH1. It was 1710 bp in size. The objective band was identified by double enzyme digestion. DNA sequence showed that UreB was in the correct open reading frame. The sequence comparison analysis showed that DNA and amino acid sequence identities of UreB gene with other strains were 98%. The sequence of UreB of H. pylori strain GZCH1 was submitted to GenBank (accession number:FJ455126). CONCLUSIONS: UreB of H. pylori strain GZCH1 is successfully cloned to pGEX-4T-1, which provides a basis for research of oral H. pylori vaccine.