著名医師による解説が無料で読めます
すると翻訳の精度が向上します
目的：リアルタイムPCR（QPCR）のDNAとして使用できるTAQMANベースの内部増幅制御（IAC）を開発および評価します。アッセイ阻害と、細菌検出のための既存のQPCRおよびQRT-PCR法への取り込みを評価するため。 方法と結果：DNA IACは、合成されてpzero-2ベクターに挿入され、大腸菌に変換された198 bpのランダム配列を生成することにより構築されました。RNA IACは、DNA IACのin vitro転写によって生成されました。両方のIAC形式は、SinglePlex TaqMan反応で個別にテストされ、既存の多重アッセイにも含まれています。DNA IACは、Shigella sppに組み込まれました。検出QPCRアッセイ（IPAHを標的とする）。RNA IACは、サルモネラ属で正常に評価されました。検出QRT-PCR（ターゲットとしてINVA mRNAを使用）。 結論：QPCRおよびQRT-PCR病原体検出方法に補充できる非常に汎用性の高いIACが開発され、病原体検出に影響を与えることなくPCR阻害剤による偽陰性の交絡効果を大幅に減らしました。 研究の重要性と影響：QPCR分析に関連する偽陰性の頻度は、特定のマトリックス、特に複雑な食品を含むマトリックスで一般的です。したがって、ここで提示されたIACは、PCRにおける予期せぬ虚偽陰性反応の解決策を提供します。
目的：リアルタイムPCR（QPCR）のDNAとして使用できるTAQMANベースの内部増幅制御（IAC）を開発および評価します。アッセイ阻害と、細菌検出のための既存のQPCRおよびQRT-PCR法への取り込みを評価するため。 方法と結果：DNA IACは、合成されてpzero-2ベクターに挿入され、大腸菌に変換された198 bpのランダム配列を生成することにより構築されました。RNA IACは、DNA IACのin vitro転写によって生成されました。両方のIAC形式は、SinglePlex TaqMan反応で個別にテストされ、既存の多重アッセイにも含まれています。DNA IACは、Shigella sppに組み込まれました。検出QPCRアッセイ（IPAHを標的とする）。RNA IACは、サルモネラ属で正常に評価されました。検出QRT-PCR（ターゲットとしてINVA mRNAを使用）。 結論：QPCRおよびQRT-PCR病原体検出方法に補充できる非常に汎用性の高いIACが開発され、病原体検出に影響を与えることなくPCR阻害剤による偽陰性の交絡効果を大幅に減らしました。 研究の重要性と影響：QPCR分析に関連する偽陰性の頻度は、特定のマトリックス、特に複雑な食品を含むマトリックスで一般的です。したがって、ここで提示されたIACは、PCRにおける予期せぬ虚偽陰性反応の解決策を提供します。
AIMS: To develop and evaluate a TaqMan-based internal amplification control (IAC) that can be used as DNA in real-time PCR (qPCR) or as RNA in reverse transcription real-time PCR (qRT-PCR) to identify the presence of assay inhibition and to evaluate its incorporation into existing qPCR and qRT-PCR methods for bacterial detection. METHODS AND RESULTS: A DNA IAC was constructed by generating a 198-bp random sequence that was synthesized and inserted into a pZErO-2 vector and transformed into Escherichia coli. The RNA IAC was generated through in vitro transcription of the DNA IAC. Both IAC formats were tested individually in singleplex TaqMan reactions and also included in existing multiplex assays. The DNA IAC was incorporated in a Shigella spp. detection qPCR assay (targeting ipaH). The RNA IAC was successfully evaluated in a Salmonella spp. detection qRT-PCR (using invA mRNA as target). CONCLUSIONS: A highly versatile IAC that can be supplemented to qPCR and qRT-PCR pathogen detection methods was developed, greatly reducing the confounding effects of false negatives because of PCR inhibitors without affecting pathogen detection. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: The frequency of false negatives associated with qPCR analyses is prevalent in certain matrices, particularly those involving complex foods. Hence, the IAC presented here provides a solution to unforeseen false-negative reactions in PCR.
医師のための臨床サポートサービス
ヒポクラ x マイナビのご紹介
無料会員登録していただくと、さらに便利で効率的な検索が可能になります。