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細胞内Ca2+濃度をより正確に決定するために、体系的に変更された条件でCa2+についてFura-2のKDを調べました。150 mm KCI、20 mM MOPS-KOH、pH 6.94、60-100 MICROM EGTA、1 MICROM FURA-2、20度CのKDで構成される溶液では、0.266 +/- 0.016 MicroM（平均+/- SEM）（平均+/- SEM）（21決定）。溶液のイオン強度（I）は、KDに強く影響を受けました。 -log kdの関係とi/（iの1 +平方根）-0.4.Iの2平方根の関係は、EGTAの3.6倍でした。KDは7.1を超えるpHで適度に変更されましたが、6.7から7.1の間でpHによって非常にわずかに変更されました。KDは温度の影響を最小限に抑えました。Mg2+のさまざまな濃度の存在下でのCa2+の見かけのKD値は、約100 mmのMg2+のKdの推定値を与えました。これは、Grynkiewicz et al。による推定値の約10倍です。[1]。この推定では、Fura-2のCa2+とMg2+の間の競合結合を想定しています。ただし、Mg2+がより複雑な方法でFura-2を結合する可能性も示唆されています。溶液中の共存タンパク質は、使用されるタンパク質の種類とは無関係に、約1.0 microMの限定値まで、見かけのKDを用量依存的に増加させました。比率方法では、（rmin + rmax）/2を与えるCa2 +濃度はkd.betaです。R値が急な依存性を示すCa2+濃度の範囲は、KDだけでなくベータによっても決定されます。これは、選択された励起スペクトルと励起波長のペアがKDであることを意味します。
細胞内Ca2+濃度をより正確に決定するために、体系的に変更された条件でCa2+についてFura-2のKDを調べました。150 mm KCI、20 mM MOPS-KOH、pH 6.94、60-100 MICROM EGTA、1 MICROM FURA-2、20度CのKDで構成される溶液では、0.266 +/- 0.016 MicroM（平均+/- SEM）（平均+/- SEM）（21決定）。溶液のイオン強度（I）は、KDに強く影響を受けました。 -log kdの関係とi/（iの1 +平方根）-0.4.Iの2平方根の関係は、EGTAの3.6倍でした。KDは7.1を超えるpHで適度に変更されましたが、6.7から7.1の間でpHによって非常にわずかに変更されました。KDは温度の影響を最小限に抑えました。Mg2+のさまざまな濃度の存在下でのCa2+の見かけのKD値は、約100 mmのMg2+のKdの推定値を与えました。これは、Grynkiewicz et al。による推定値の約10倍です。[1]。この推定では、Fura-2のCa2+とMg2+の間の競合結合を想定しています。ただし、Mg2+がより複雑な方法でFura-2を結合する可能性も示唆されています。溶液中の共存タンパク質は、使用されるタンパク質の種類とは無関係に、約1.0 microMの限定値まで、見かけのKDを用量依存的に増加させました。比率方法では、（rmin + rmax）/2を与えるCa2 +濃度はkd.betaです。R値が急な依存性を示すCa2+濃度の範囲は、KDだけでなくベータによっても決定されます。これは、選択された励起スペクトルと励起波長のペアがKDであることを意味します。
To determine intracellular Ca2+ concentrations more accurately, we examined Kd of Fura-2 for Ca2+ in conditions which were systemically changed. In a solution comprising of 150 mM KCI, 20 mM MOPS-KOH, pH 6.94, 60-100 microM EGTA and 1 microM Fura-2, Kd at 20 degrees C was 0.266 +/- 0.016 microM (mean +/- SEM) (21 determinations). The ionic strength (I) of the solution strongly affected Kd: the relation of -log Kd versus 2 square root of I/(1 + square root of I) - 0.4.I was 3.6 times as steep as that of EGTA. Kd was moderately changed by pH higher than 7.1, while it was very slightly changed by pH between 6.7 and 7.1. Kd was minimally affected by temperature. The apparent Kd values for Ca2+ in the presence of various concentrations of Mg2+ gave an estimate of the Kd for Mg2+ of about 100 mM, which is about 10 times as great as the estimated value by Grynkiewicz et al. [1]. This estimation assumes competitive binding between Ca2+ and Mg2+ for Fura-2. However, the possibility that Mg2+ may bind Fura-2 in a more complicated way is also suggested. Co-existing proteins in the solution dose-dependently increased an apparent Kd, independent of the type of proteins used, up to a limiting value of about 1.0 microM. With the ratio method, the Ca2+ concentration which gives (Rmin + Rmax)/2 is Kd.beta. The range of Ca2+ concentrations on which R values show steep dependence is determined not only by Kd but also by beta. This means that the excitation spectra and pair of excitation wavelengths selected as well as Kd are critical factors.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)
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