ドーピングコントロールの問題としての尿中AICAR濃度の定量化

エリートスポーツの持久力に影響を与えることは、現代のスポーツ科学の重要なポイントの1つです。最近、ドーピングコントロール研究所の焦点で到達した新しいクラスの禁止物質が到達し、その誤用は遺伝子ドーピングとして分類されました。アデノシン単リン酸活性化プロテインキナーゼ活性化因子5-アミノ-4-イミダゾレカルボキシアミドリボヌクレオシド（AICAR）は、治療後の座りがちなマウスでも耐久性を大幅に促進することがわかりました。健康な人間におけるAICARの内因性産生により、循環にかなりの量が存在したため、尿に排泄されました。これらの事実を考慮して、本研究は、エリートアスリートにおけるRenally Cleared AICARの参照値を修正するために開始されました。したがって、ネイティブ尿の穏やかな希釈で構成されるサンプル調製の後、タンデム質量分析に結合した同位体希釈液クロマトグラフィー（分析カラム：C6-フェニル）による定量的分析方法が開発されました。499人のアスリートのドーピングコントロールサンプルを分析し、尿中のAICAR濃度を決定しました。すべてのサンプルの平均AICAR値は2,186 ng/mlで、標準偏差は1,655 ng/mLでした。濃度は、性別、スポーツの種類、サンプル収集の種類によって異なることがわかりました（競争/競争外）。この方法は、低、中濃度、高濃度、堅牢性、精度（精度）で、パラメーターの線形性、12％、7％、および10％）、および日中の精度（14％、9％、および12％）を考慮して、定量的な目的で完全に検証されました。約100％）、定量化の制限（100 ng/ml）、安定性およびイオン抑制効果、内部合成（13）C（5） - 標準的なAICARを内部標準として使用しています。

Influencing the endurance in elite sports is one of the key points in modern sports science. Recently, a new class of prohibited substances reached in the focus of doping control laboratories and their misuse was classified as gene doping. The adenosine monophosphate activated protein kinase activator 5-amino-4-imidazolecarboxyamide ribonucleoside (AICAR) was found to significantly enhance the endurance even in sedentary mice after treatment. Due to endogenous production of AICAR in healthy humans, considerable amounts were present in the circulation and, thus, were excreted into urine. Considering these facts, the present study was initiated to fix reference values of renally cleared AICAR in elite athletes. Therefore a quantitative analytical method by means of isotope-dilution liquid chromatography (analytical column: C6-phenyl) coupled to tandem mass spectrometry, after a sample preparation consisting of a gentle dilution of native urine, was developed. Doping control samples of 499 athletes were analysed, and AICAR concentrations in urine were determined. The mean AICAR value for all samples was 2,186 ng/mL with a standard deviation of 1,655 ng/mL. Concentrations were found to differ depending on gender, type of sport and type of sample collection (in competition/out of competition). The method was fully validated for quantitative purposes considering the parameters linearity, inter- (12%, 7% and 10%) and intraday precision (14%, 9% and 12%) at low, mid and high concentration, robustness, accuracy (approx. 100%), limit of quantification (100 ng/mL), stability and ion suppression effects, employing an in-house synthesised (13)C(5)-labelled AICAR as internal standard.