自己蛍光の内部クエンチャーとしての3-ニトロ - チロシンは、OBOCコンビナトリアルライブラリーの蛍光ベースのスクリーニングの互換性を高めます

1つのビード1つのコンパウンド（OBOC）の組み合わせ法では、化合物が各ビーズに同じ化合物の複数のコピーが表示されるように、スプリットミックスライブラリ合成を介してビーズ樹脂に構築されます。これらのライブラリは、酵素結合比色、蛍光、放射、または全細胞結合アッセイで迅速にスクリーニングされます。蛍光ベースのプローブはOBOCスクリーニングの強力なツールですが、その有用性は、一般的に使用される多くの固体サポート（テンタゲルなど）、残留結合試薬、およびライブラリー化合物の固有の蛍光によって大きく制限されています。この問題を克服するために、薄いFMOCで保護された外層と保護されていない内部コアを使用して、トポロジカルなテンタゲル樹脂を分割しました。内側のコアを3-ニトロティロシンで誘導体化し、ランダムペプチドライブラリー構造を使用しました。共焦点顕微鏡からのスペクトルスキャンでは、空白のビーズとOBOCペプチドライブラリーの自己蛍光の劇的な減少が、広範囲の光学スペクトルにわたって減少しました。3-ニトロティロシンの消光能力も蛍光顕微鏡写真で視覚化されました。ビオチン/ストレプトアビジンをモデルリガンド/受容体システムとして使用して、クエンチされたビーズに結合する3つの市販の3つの蛍光プローブの可視性が顕著に増加し、コパとして知られる堅牢で効率的な蛍光ベースのビーズソーティングプラットフォームを使用した実現可能性を高めました。これらのデータは、3-ニトロティロシンを内部クエンチャーとして使用すると、蛍光ベースのアプリケーションとOBOC組み合わせスクリーニングの互換性が大幅に向上することを示しています。

In the one-bead-one-compound (OBOC) combinatorial method, compounds are constructed on bead resin via split-mix library synthesis such that multiple copies of the same compound are displayed on each bead. These libraries are rapidly screened with enzyme-linked colorimetric, fluorescent, radiometric, or whole-cell binding assays. While fluorescence-based probes are powerful tools in OBOC screening, their utility is greatly limited by the intrinsic fluorescence of many commonly used solid supports, (e.g. TentaGel), residual coupling reagents, and library compounds. To overcome this problem, we topologically partitioned TentaGel resin with a thin Fmoc-protected outer layer and an unprotected inner core. The inner core was derivatized with 3-nitro-tyrosine, followed by random peptide library construction. Spectral scans from a confocal microscope showed a dramatic decrease in the autofluorescence of blank beads and OBOC peptide libraries across a broad range of the optical spectrum. The quenching capacity of 3-nitro-tyrosine was also visualized in fluorescent micrographs. Using biotin/streptavidin as a model ligand/receptor system, we demonstrated a marked increase in visibility of three commercially available fluorescent probes binding to quenched beads, and increased feasibility of using a robust and efficient fluorescence-based, bead sorting platform known as COPAS. These data show that using 3-nitro-tyrosine as an internal quencher greatly enhances the compatibility of fluorescence-based applications and OBOC combinatorial screening.