Caenorhabditis elegansにおける複数の遺伝子の同時ノックダウンのための修正された給餌RNAi法

RNA干渉（RNAI）は、caenorhabditis elegansの逆の遺伝的アプローチのための一般的に使用される技術です。RNAiの給餌は、ゲノム全体のRNAiスクリーンを実行するための最も便利で安価な方法です。ただし、それぞれに1つのdsRNA種が含まれていた細菌の混合物を使用してRNAiに供給することにより、2つの遺伝子（二重RNAi）のノックダウンが不十分な結果をもたらすことが報告されています。この非効率性の問題を克服するために、2つの遺伝子フラグメントを含む単一のRNAiコンストラクトを使用して、二重給餌RNAiメソッドを設計およびテストしました。3つの異なる遺伝子セットを使用した実験から、新しいダブルRNAi法が一貫して生成されたダブルノックダウン表現型が一貫して生成されることがわかりました。ここで説明する二重給餌RNAiアプローチは、C。elegansの複数の遺伝子の枯渇によって引き起こされる表現型を一貫して調べる方法を提供します。

RNA interference (RNAi) is a commonly used technique for reverse genetic approaches in Caenorhabditis elegans. Feeding RNAi is the most convenient and inexpensive method for performing genome-wide RNAi screens. However, it has been reported that knock-down of two genes (double RNAi) by feeding RNAi using a mixture of bacteria that each contained one dsRNA species produced poor results. To overcome this problem of inefficiency, we designed and tested a double feeding RNAi method using a single RNAi construct containing two gene fragments. From experiments with three different sets of genes, we found that the new double RNAi method consistently produced significantly enhanced double knock-down phenotypes. The double feeding RNAi approach described here provides a method to consistently examine phenotypes caused by depletion of more than one gene in C. elegans.