マイコバクテリアのテトラサイクリン誘導性ベクターを改善しました

以前に、テトラサイクリン誘導性ベクターPMindの開発と評価について報告しました（Blokpoel et al。、2005）。ここでは、誘導因子の非存在下での基礎転写の減少と誘導因子の存在下での折りたたみ誘導の増加の両方を示す改善されたPMINDベクターの発達を報告します。リプレッサータンパク質のアミノ酸変化であるTERT（Z）は、テトラサイクリンの存在下での元のPMIND-LXと比較して、基礎転写の6倍の減少とLuxABの100倍の誘導をもたらしました。改良されたベクター（PMEND-LX）の統合バージョンが構築され、その結果、PMIND-LXと比較して基底転写が9倍減少し、テトラサイクリンの存在下でのLUCKABの17倍の誘導が生成されました。PMEND Tetroプロモーターを代替ベクトルバックボーンにクローニングすることにより、さらなる改善が得られました。得られたベクトルであるPKW08-LXは、PMIND-LXと比較して背景が70倍減少し、テトラサイクリンの存在下で230倍のLuxab誘導を示しました。PKW08-LXの統合バージョンが構築され、このベクトルの基礎転写はゼロでした。テトラサイクリンの存在下では、11倍のルクスブの誘導が観察されました。これらの改善されたマイコバクテリアベクターの構築は、遺伝的研究に非常に役立つことが証明されます。

We have previously reported on the development and assessment of the tetracycline inducible vector pMIND (Blokpoel et al., 2005). Here we report the development of improved pMIND vectors that exhibit both reduced basal transcription in the absence of inducer and increased fold induction in the presence of inducer. An amino acid change in the repressor protein, TetR(Z), produced a 6-fold reduction in basal transcription compared to the original pMIND-Lx and a 100-fold induction of LuxAB in the presence of tetracycline. An integration version of the improved vector (pMEND-Lx) was constructed which resulted in a 9-fold reduction in basal transcription compared to pMIND-Lx and a 17-fold induction of LuxAB in the presence of tetracycline. Further improvements were obtained by cloning the pMEND TetRO promoter into an alternative vector backbone. The resulting vector, pKW08-Lx, exhibited a 70-fold reduction in background compared to pMIND-Lx and a 230-fold induction of LuxAB in the presence of tetracycline. An integration version of pKW08-Lx was constructed and the basal transcription for this vector was zero; an 11-fold induction of LuxAB was observed in the presence of tetracycline. The construction of these improved mycobacterial vectors will prove extremely useful for genetic studies.