エビのトロポミオシンのIgE結合特性に対する沸騰の影響（Litopenaeus vannamei）

生および沸騰したエビ抽出物とトロポミオシン（TM）の熱安定性とIgE結合は報告されていません。この研究では、litopenaeus vannameiの生と沸騰したエビTMの安定性を比較し、沸騰がL. vannameiのアレルゲン性をどのように変化させるかを評価します。抽出物を生および沸騰したエビから調製し、ドデシル硫酸ナトリウム - ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）および2次元電気泳動で分析しました。抽出物のIgE結合は、西部のブロットおよび競合阻害酵素結合免疫吸着アッセイ（IELISA）によって決定されました。次に、TMを生および沸騰したエビから精製しました。エビは、円形二色（CD）分光法によって分析された二次構造、およびスロットブロット分析によって比較されたIgE結合から精製されました。可溶性タンパク質含有量は減少し、高分子量タンパク質は沸騰したものと生のエビからの抽出物で増加しました。ウエスタンブロット分析を使用すると、抽出物によって同様のIgE結合特性が見られました。IELISAの結果は、生のエビからの抽出物が沸騰したエビからの抽出物よりも高いIgEを結合することを示しましたが、ドットブロットアッセイは、生のエビよりも沸騰したエビから精製されたTMへのより高いIgE結合を示しています。精製されたTMには、典型的なアルファヘリカル二次構造があり、沸騰したTMの安定性は生のTMの安定性よりも低かった。沸騰したエビからの抽出物は、生のエビからの抽出物よりも低いIgE結合を生成します。これは、沸騰がエビアレルゲン性を低下させるためのツールとして使用できることを示唆しています。しかし、生のエビのそれよりも増強されたIgE結合を示す沸騰したエビから精製されたTMは、免疫測定を通じてエビアレルギーを診断する際のより効果的な抗原である可能性があります。

The thermal stability and IgE binding of raw and boiled shrimp extracts and the tropomyosins (TM) have not been reported. In this study, we compare the stability of raw and boiled shrimp TM of Litopenaeus vannamei and evaluate how boiling may alter the allergenicity of L. vannamei. Extracts were prepared from raw and boiled shrimp and analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and two-dimensional electrophoresis. The IgE-binding of the extracts was determined by western-blot and competitive inhibition enzyme-linked immunosorbent assay (iELISA). The TM was then purified from raw and boiled shrimp, the secondary structures analyzed by circular dichroism (CD) spectroscopy, and the IgE binding compared by slot blot analysis. The soluble protein content decreased and the higher molecular weight proteins increased in the extracts from boiled versus raw shrimp. Similar IgE binding characteristics were seen by extracts when using western blot analysis. Although iELISA results showed that extracts from raw shrimp bound higher IgE than extracts from boiled shrimp, dot-blot assay demonstrates higher IgE binding to purified TM from boiled shrimp than raw shrimp. The purified TM had a typical alpha-helical secondary structure and the stability of boiled TM was lower than that of raw TM. Extracts from boiled shrimp produce lower IgE binding than extracts from raw shrimp, which suggest that boiling can be used as a tool in attempting to reduce shrimp allergenicity. However, the purified TM from boiled shrimp, which shows enhanced IgE binding over that of raw shrimp, may be a more effective antigen in diagnosing shrimp allergy through immunoassay.