HuRはauf1を補因子として使用してp16ink4 mRNA減衰を促進します

この研究では、HuRがp16（INK4）mRNAを不安定にすることを示します。HuRまたはAUF1のノックダウンによりP16発現が増加しましたが、付随するAUF1とHuRノックダウンは効果がはるかに弱かった。RNA誘導サイレンシング複合体（RISC）の成分であるAgo2のノックダウン、安定化p16 mRNA。HuRのノックダウンは、P16 3 '非翻訳領域（3'UTR）とAUF1とその逆の関連を減少させました。HuRまたはAUF1のノックダウンにより、Ago2とP16 3'utrとの関連性が減少しましたが、Ago2ノックダウンはHuRまたはAUF1にP16 3'utrに結合することには影響しませんでした。EGFP-P16キメラレポーター転写産物の使用は、P16 mRNA減衰がP16 3'UTRに存在するステムループ構造に依存していることを明らかにしました。ステムループ構造。老化およびHurサイレンティングされたIDH4ヒト二倍体線維芽細胞では、EGFP-P16 3'UTR転写産物がより安定していました。我々の結果は、RISCをリクルートすることによりHuRがP16 mRNAを不安定にすることを示唆しています。これは、P16 3'UTRの二次構造に依存し、補因子としてAUF1を必要とする効果です。

In this study, we show that HuR destabilizes p16(INK4) mRNA. Although the knockdown of HuR or AUF1 increased p16 expression, concomitant AUF1 and HuR knockdown had a much weaker effect. The knockdown of Ago2, a component of the RNA-induced silencing complex (RISC), stabilized p16 mRNA. The knockdown of HuR diminished the association of the p16 3' untranslated region (3'UTR) with AUF1 and vice versa. While the knockdown of HuR or AUF1 reduced the association of Ago2 with the p16 3'UTR, Ago2 knockdown had no influence on HuR or AUF1 binding to the p16 3'UTR. The use of EGFP-p16 chimeric reporter transcripts revealed that p16 mRNA decay depended on a stem-loop structure present in the p16 3'UTR, as HuR and AUF1 destabilized EGFP-derived chimeric transcripts bearing wild-type sequences but not transcripts with mutations in the stem-loop structure. In senescent and HuR-silenced IDH4 human diploid fibroblasts, the EGFP-p16 3'UTR transcript was more stable. Our results suggest that HuR destabilizes p16 mRNA by recruiting the RISC, an effect that depends on the secondary structure of the p16 3'UTR and requires AUF1 as a cofactor.