Trizol（Tri Reagent）を使用したRNAの精製

Trizolの可溶化と抽出は、RNAを脱タンパクするための比較的最近開発された一般的な方法です。この方法は、細胞または組織が内因性RNaseのために濃縮される場合、または核RNAからの細胞質RNAの分離が非現実的である場合に特に有利です。Trizol（またはTri Reagent）は、フェノールとイソチオシアネートグアニジニウムの単相溶液であり、同時に生物学的物質を可溶化し、タンパク質を変性させます。可溶化後、クロロホルムを添加すると相分離（フェノールでの抽出：クロロホルム：イソアミルアルコール）を引き起こします。ここで、タンパク質が有機相に抽出され、DNAは界面で分離し、RNAは水相に残ります。したがって、RNA、DNA、およびタンパク質は、単一のサンプルから精製できます（したがって、Trizolという名前）。Trizol抽出は、MicroRNA、Piwi-Ascosiated RNA、または内生的な小さな干渉RNAなどの小さなRNAを分離するための効果的な方法でもあります。ただし、Trizolは高価であり、RNAペレットを再懸濁するのが難しい場合があります。したがって、通常のフェノール抽出が実用的である場合、Trizolの使用はお勧めしません。

TRIzol solubilization and extraction is a relatively recently developed general method for deproteinizing RNA. This method is particularly advantageous in situations where cells or tissues are enriched for endogenous RNases or when separation of cytoplasmic RNA from nuclear RNA is impractical. TRIzol (or TRI Reagent) is a monophasic solution of phenol and guanidinium isothiocyanate that simultaneously solubilizes biological material and denatures protein. After solubilization, the addition of chloroform causes phase separation (much like extraction with phenol:chloroform:isoamyl alcohol), where protein is extracted to the organic phase, DNA resolves at the interface, and RNA remains in the aqueous phase. Therefore, RNA, DNA, and protein can be purified from a single sample (hence, the name TRIzol). TRIzol extraction is also an effective method for isolating small RNAs, such as microRNAs, piwi-associated RNAs, or endogeneous, small interfering RNAs. However, TRIzol is expensive and RNA pellets can be difficult to resuspend. Thus, the use of TRIzol is not recommend when regular phenol extraction is practical.