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Analytical and bioanalytical chemistry2010Aug01Vol.397issue(8)

ペプチド核酸と二本鎖DNAハイブリダイゼーションに基づく電気化学DNAバイオセンサーを使用して、C型肝炎ウイルス遺伝子型3aに対応する二本鎖オリゴヌクレオチドの直接検出と識別

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文献タイプ:
  • Evaluation Study
  • Journal Article
概要
Abstract

金電極を使用して、その変性なしに、C型肝炎ウイルス遺伝子型3aに対応する二本鎖オリゴヌクレオチド(DSDNA)の直接検出と識別のための電気化学DNAバイオセンサーの開発について説明します。電気化学DNAセンサーは、6-メルカプト-1-ヘキサノールと、C型肝炎ウイルス遺伝子型3a Core/E1領域に関連する14-MERペプチド核酸プローブの自己組織化モノラレを伴う金電極の修飾に依存しています。ターゲットDS-DNAとの自己組織化プローブのハイブリダイゼーションにより、トリプレックスを形成するための自己組織化プローブの微分パルスボルタンメトリック応答の増加は、検出と識別の背後にある原理です。開発されたDNAセンサーがDS-DNA標的に選択的に応答するかどうかを評価するために、非補体オリゴヌクレオチドを用いたいくつかのハイブリダイゼーション実験を実施しました。バイオセンサーの診断パフォーマンスが説明され、リン酸緩衝液溶液では1.8 x 10(-12)mであることが検出限界が見つかりました。3つの独立したプローブ修飾電極で実行された標的DS-DNAの100 pmの測定の相対標準偏差は3.1%であり、検出方法の顕著な再現性を示しています。

金電極を使用して、その変性なしに、C型肝炎ウイルス遺伝子型3aに対応する二本鎖オリゴヌクレオチド(DSDNA)の直接検出と識別のための電気化学DNAバイオセンサーの開発について説明します。電気化学DNAセンサーは、6-メルカプト-1-ヘキサノールと、C型肝炎ウイルス遺伝子型3a Core/E1領域に関連する14-MERペプチド核酸プローブの自己組織化モノラレを伴う金電極の修飾に依存しています。ターゲットDS-DNAとの自己組織化プローブのハイブリダイゼーションにより、トリプレックスを形成するための自己組織化プローブの微分パルスボルタンメトリック応答の増加は、検出と識別の背後にある原理です。開発されたDNAセンサーがDS-DNA標的に選択的に応答するかどうかを評価するために、非補体オリゴヌクレオチドを用いたいくつかのハイブリダイゼーション実験を実施しました。バイオセンサーの診断パフォーマンスが説明され、リン酸緩衝液溶液では1.8 x 10(-12)mであることが検出限界が見つかりました。3つの独立したプローブ修飾電極で実行された標的DS-DNAの100 pmの測定の相対標準偏差は3.1%であり、検出方法の顕著な再現性を示しています。

Development of an electrochemical DNA biosensor for the direct detection and discrimination of double-stranded oligonucleotide (dsDNA) corresponding to hepatitis C virus genotype 3a, without its denaturation, using a gold electrode is described. The electrochemical DNA sensor relies on the modification of the gold electrode with 6-mercapto-1-hexanol and a self-assembled monolayer of 14-mer peptide nucleic acid probe, related to the hepatitis C virus genotype 3a core/E1 region. The increase of differential pulse voltammetric responses of methylene blue, upon hybridization of the self-assembled probe with the target ds-DNA to form a triplex is the principle behind the detection and discrimination. Some hybridization experiments with non-complementary oligonucleotides were carried out to assess whether the developed DNA sensor responds selectively to the ds-DNA target. Diagnostic performance of the biosensor is described and the detection limit was found to be 1.8 x 10(-12) M in phosphate buffer solution, pH 7.0. The relative standard deviation of measurements of 100 pM of target ds-DNA performed with three independent probe-modified electrodes was 3.1%, indicating a remarkable reproducibility of the detection method.

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