移動しにくいHuvec細胞における最初のsiRNAライブラリースクリーニング

標的遺伝子同定のための意味のあるRNAiベースのデータは、生物学的に関連する細胞タイプの使用と、選択された細胞型への高機能siRNA試薬の効率的な送達に強く依存しています。ここでは、原発性細胞でのsiRNAスクリーニングのためのAmaxa（R）Nucleofector（R）96-Wellシャトル（R）システムの使用を報告します。LONZAのクロネティクス（R）HUVECヒューマン臍静脈内皮細胞に、タンパク質キナーゼと細胞周期関連遺伝子を標的とするThermo Scientific Dharmacon Sigenome（R）siRNAライブラリをトランスフェクトし、細胞生存率に重要な遺伝子をスクリーニングしました。37の一次ヒットのうち、33のダウンレギュレーションにより、増殖が減少または細胞死の増加が生じ、2つのダウンレギュレーションにより細胞の生存率が向上しました。16の最も強力な一次ヒット（COPB2、PYCS、CDK4、およびMYC）のうち、検証された4つの遺伝子は、HUVEC細胞の生存の重要性が異なることを反映して、さまざまな程度の細胞増殖に影響を与えました。我々の結果は、Nucleofector（R）96-Well Shuttle（R）システムにより、以前はトランスフェクトが困難であると考えられていた細胞型でsiRNAライブラリを送達できることを示しています。したがって、細胞型の選択は脂質媒介トランスフェクションによってアクセス可能なものに限定されないため、遺伝子ターゲットの識別と検証を一次細胞で実行できるようになりました。

Meaningful RNAi-based data for target gene identification are strongly dependent on the use of a biologically relevant cell type and efficient delivery of highly functional siRNA reagents into the selected cell type. Here we report the use of the Amaxa(R) Nucleofector(R) 96-well Shuttle(R) System for siRNA screening in primary cells. Lonza's Clonetics(R) HUVEC-Human Umbilical Vein Endothelial Cells were transfected with Thermo Scientific Dharmacon siGENOME(R) siRNA Libraries targeting protein kinases and cell cycle related genes and screened for genes important for cell viability. Of the 37 primary hits, down-regulation of 33 led to reduced proliferation or increased cell death, while down-regulation of two allowed for better cell viability. The validated four genes out of the 16 strongest primary hits (COPB2, PYCS, CDK4 and MYC) influenced cell proliferation to varying degrees, reflecting differing importance for survival of HUVEC cells. Our results demonstrate that the Nucleofector(R) 96-well Shuttle(R) System allows the delivery of siRNA libraries in cell types previously considered to be difficult to transfect. Thus, identification and validation of gene targets can now be conducted in primary cells, as the selection of cell types is not limited to those accessible by lipid-mediated transfection.