TN7のサイト固有の挿入を促進するTNSD-ATTTN7複合体の特性評価

細菌トランスポゾンTN7は、ATTTN7と呼ばれる特定の部位を認識し、高度に保存された染色体GLMS遺伝子のすぐ下流を挿入する能力によって区別されます。TNSDは、TN7のATTTN7への部位固有の挿入に必要な4つのトランスポゾンエンコードポリペプチド（TNSABC+D）の1つであり、GLMSタンパク質コーディング領域の終わりに高度に保存されたシーケンスに結合するターゲットサイトセレクターです。この研究では、TNSD-ATTTN7相互作用に重要なこの領域内の重要なヌクレオチドを特定しました。また、ATTTN7と相互作用するTNSDの領域を調査し、アミノ末端CCCH亜鉛フィンガーモチーフを含むタンパク質の全長にわたって重要なDNA結合決定因子があることを発見しました。TNSDの重要な役割は、非シーケンス特異的DNA結合タンパク質TNSCをATTTN7にリクルートすることです。TNSCは、TN7トランスポサゼのTNSAおよびTNSBサブユニットの両方と相互作用し、制御します。TNSCは、in vivoでTNSDのATTTN7への結合を刺激し、TNSCDとTNSDはDNAの非存在下でも相互作用し、各タンパク質のN末端領域に相互作用ドメインを局在させることもできます。

The bacterial transposon Tn7 is distinguished by its ability to recognize a specific site called attTn7, and insert just downstream of the highly conserved chromosomal glmS gene. TnsD is one of four transposon-encoded polypeptides (TnsABC+D) required for site-specific insertion of Tn7 into attTn7, and is the target site-selector that binds to a highly conserved sequence in the end of the glmS protein coding region. In this study, we identified important nucleotides within this region that are crucial for TnsD-attTn7 interaction. We also probed the regions of TnsD that interact with attTn7 and found that there are important DNA-binding determinants throughout the entire length of the protein, including an amino-terminal CCCH zinc-finger motif. A key role of TnsD is to recruit the non-sequence specific DNA-binding protein TnsC to attTn7; TnsC also interacts with and controls both the TnsA and TnsB subunits of the Tn7 transposase. TnsC stimulates the binding of TnsD to attTn7 in vivo, and TnsCD and TnsD can also interact in the absence of DNA and localize their interaction domains to the N-terminal region of each protein.